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- 2025年07月13日
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免疫细胞化学染色方法
1、细胞标本置于载玻片上；
2、固定：建议使用95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林固定液固定10分钟；
3、稍水洗，载玻片上加1%Triton X-100试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
4、根据第一抗体的要求，对细胞进行相应的抗原修复；
5、如有必要，每张载玻片上加过氧化物酶阻断试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
6、除去PBS，载玻片上加第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，PBS冲洗3x3分钟；
7、除去PBS，载玻片上加检测试剂盒（按照试剂盒说明书进行操作），PBS冲洗3x3分钟；
8、除去PBS，根据检测试剂盒选择相应的显色系统，后中性树胶封固。
备注：更好的方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢，再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片，再按照免疫组化染色步骤进行操作。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50-75%。
组织的固定：病理学研究和免疫组化实验中，组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中，使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用，防止细胞自溶等，从而保持组织和细胞内的抗原性，使抗原不失活。
SPARC相关组件钙结合蛋白1,SMOC1,免疫组化试剂盒人具有以下特点：多聚物技术，使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度的敏感性、染色强度，可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色，更适合于生物素含量较高的组织细胞的免疫组化实验；孵育时间短，只需孵育15分钟，使得免疫组化实验时间大为缩短，是医院病理科开展免疫组化实验的理想试剂盒。
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文献和实验calphotin|钙感光蛋白[感光细胞的一种钙结合蛋白] calprotectin|（肌）钙网蛋白[骨骼肌肌质网膜上的钙结合蛋白] calretinin|钙（视）网膜蛋白 calsequestrin|（肌）集钙蛋白 calspectin|钙影蛋白 calspermin|钙精蛋白[睾丸的一种钙调蛋白结合蛋白] caltractin|钙牵蛋白[一种与基粒相关的钙结合蛋白]
E.coli启动子的核心区域，即-10和-35六核苷酸区和一15-19bp的间隔序列。但有人提出核心序列以外的元件也能刺激启动子的活性[52]。许多研究也已证明，核心启动子上游的序列能够在体内提高转录起始的效率[53，54，55]。Gourse等证明，位于E.coli rRNA启动子rrnB P1 -35区上游的DNA序列即UP元件，能够在体内和体外提高转录效率30倍[56]。UP元件是作为一个独立的启动子组件发挥作用的，因为将其融合到其他启动子如lacUV5中也能刺激转录[57,58]。UP元件
Adeno-associated virus(AAV) 腺相关病毒，一种小的DNA病毒，能被基因处理而传送基固结合多种细胞，包括癌细胞及免系统的细胞。 Adeno-xarcinoma sequence 腺瘤-腺癌顺序演变，代表良性黏膜恶性转化各期的一连串形态变化。 Adeno-viral vector 腺病毒载体，一种基因被修饰过的腺病毒，其中一部人正常的病毒基因组已经缺失以防止病毒的复制，而被将要导入靶细胞的新基因所替代。
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