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免疫细胞化学染色方法
1、细胞标本置于载玻片上;
2、固定:建议使用95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林固定液固定10分钟;
3、稍水洗,载玻片上加1%Triton X-100试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3x3分钟;
4、根据第一抗体的要求,对细胞进行相应的抗原修复;
5、如有必要,每张载玻片上加过氧化物酶阻断试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3x3分钟;
6、除去PBS,载玻片上加第一抗体,室温下孵育60分钟或4℃过夜,PBS冲洗3x3分钟;
7、除去PBS,载玻片上加检测试剂盒(按照试剂盒说明书进行操作),PBS冲洗3x3分钟;
8、除去PBS,根据检测试剂盒选择相应的显色系统,后中性树胶封固。
备注:更好的方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢,再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片,再按照免疫组化染色步骤进行操作。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂,如酶、金属离子、同位素等,显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化,从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中,免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50-75%。
组织的固定:病理学研究和免疫组化实验中,组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中,使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用,防止细胞自溶等,从而保持组织和细胞内的抗原性,使抗原不失活。
细胞因子信号转导抑制因子1,SOCS1,免疫组化试剂盒大鼠具有以下特点:多聚物技术,使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度的敏感性、染色强度,可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色,更适合于生物素含量较高的组织细胞的免疫组化实验;孵育时间短,只需孵育15分钟,使得免疫组化实验时间大为缩短,是医院病理科开展免疫组化实验的理想试剂盒。
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文献和实验蛋白激酶IRAKl/IRAK4与衔接蛋白MyD88 解离,阻止TLR信号转导中IRAKl―TRAF复合物的形成;②SOCSl:细胞因子信号转导抑制因子,此处作用于IRAKl,抑制TLR信号途径;③MyD88s:一种缺少中间结构域的MyD88变异体,不能结合IRAK4,与正常MyD88竞争后,终止IRAKl的磷酸化;④ST2和SIGIRR:两者皆为带有TlR结构域的膜结合分子,抑制TI.R信号转导中衔接蛋白TIRAP和MyD88的活性。⑤ASKl:对NF-;cB及MAPK的抑制作用已如上述
TNF作为一种细胞因子,不仅具有抗病毒复制作用,还有抗肿瘤、控制细胞增殖等效应作用。上面提到,TNF可通过多种途径杀伤靶细胞。另外,TNF尚可通过TNFRl启动细胞凋亡途径,其相应的信号转导与Fas-FasL介导的途径既有相似性又有不同。 TNF介导的细胞死亡信号转导途径TRADD:TNF受体相关死亡区域;RIP:受体相互作用蛋白;TRAF2:TNF相关因子2; NIK:NExB诱导激酶;IKK:LxB激酶复合体抑制因子。
——组成①蛋白质:普通蛋白质——生物发生:细胞溶质蛋白、细胞膜融合和转运相关蛋白、信号转导蛋白、热休克蛋白、四次跨膜超家族等;细胞特异性蛋白质——特定功能:免疫球蛋白超家族、共刺激分子、肿瘤抗原等。②胆固醇与脂类富含胆固醇;脂类:鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸、神经节甘苷脂等③核酸携带的 mRNA 成分可以进入细胞浆中可以被翻译成蛋白质;exosomes 所转移的 microRNA 在进入靶细胞后可以靶向调节细胞中 mRNA 的水平。3. 外泌体的产生与生物学特性——生理功能细胞通讯功能:①免疫调节②凋亡③
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