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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
17
- 供应商:
圻明
- 检测范围:
详见说明
- 检测方法:
免疫组织化学
- 应用:
病理学研究
- 适应物种:
人大小鼠兔牛
- 标记物:
HRP-SA
- 样本:
组织
- 规格:
50T-100T
免疫细胞化学染色方法
1、细胞标本置于载玻片上;
2、固定:建议使用95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林固定液固定10分钟;
3、稍水洗,载玻片上加1%Triton X-100试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3x3分钟;
4、根据第一抗体的要求,对细胞进行相应的抗原修复;
5、如有必要,每张载玻片上加过氧化物酶阻断试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3x3分钟;
6、除去PBS,载玻片上加第一抗体,室温下孵育60分钟或4℃过夜,PBS冲洗3x3分钟;
7、除去PBS,载玻片上加检测试剂盒(按照试剂盒说明书进行操作),PBS冲洗3x3分钟;
8、除去PBS,根据检测试剂盒选择相应的显色系统,后中性树胶封固。
备注:更好的方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢,再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片,再按照免疫组化染色步骤进行操作。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂,如酶、金属离子、同位素等,显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化,从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中,免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50-75%。
组织的固定:病理学研究和免疫组化实验中,组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中,使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用,防止细胞自溶等,从而保持组织和细胞内的抗原性,使抗原不失活。
尿苷三磷酸,UTP,免疫组化试剂盒通用具有以下特点:多聚物技术,使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度的敏感性、染色强度,可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色,更适合于生物素含量较高的组织细胞的免疫组化实验;孵育时间短,只需孵育15分钟,使得免疫组化实验时间大为缩短,是医院病理科开展免疫组化实验的理想试剂盒。
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文献和实验210kD的同一多肽链上,是一个多功能酶;因此更有利于以均匀的速度参与嘧啶核苷酸的合成。与此相类似,反应(5)和(6)的酶(乳清酸磷酸核糖转移酶和OMP脱羧酶)也位于同一条多肽链上。嘌呤核苷酸合成的反应(3)、(4)、(6),反应(7)和(8)及反应(10)和(11)也均为多功能酶。这些多功能酶的中间产物并不释放到介质中,而在连续的酶间移动,这种机制能加速多步反应的总速度,同时防止细胞中其它酶的破坏。 2.UTP和CTP的合成 三磷酸尿苷(UTP)的合成与三磷酸嘌呤核苷的合成相似
CO2 合成糖。蔗糖不仅是重要的光合作用产物,而且是糖类在植物体内转运的主要形式;在自然界分布很广,特别在甘蔗、甜菜、菠萝的汁液中最多。蔗糖在高等植物中的主要合成途径是: UDPG 6-磷酸果糖→ UDP 磷酸蔗糖 磷酸蔗糖→蔗糖 磷酸 式中 UDPG是尿苷二磷酸葡萄糖的缩写符号,其结构式是: 它是由 1-磷酸葡萄糖与尿苷三磷酸( UTP)作用生成的。淀粉合成时,主要的葡萄糖基供体是腺苷二
生物素基的UTP类似物,在酶促反应下,将生物素掺入DNA.此生物素标记的DNA探针,可与RNA或DNA进行原位杂交或在Southern印迹膜上进行杂交.近年来,寡核苷酸探针越来越引起人们的注意,展示了广阔的应用前景.寡核苷酸探针的主要优点是能区分单一核苷酸点突变顺序.能被用于分析发生单一碱基置换的基因.1984年Murasugi报道了一具23mer的寡核苷酸探针的酶促合成,这个探针的士’端具有一个含生物素基脱氧尿苷酸(Bio-dUTP).具体讲,Bio-dUTP通过E.Coli DNA聚合酶I进行引物
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