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- 2025年07月13日
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免疫细胞化学染色方法
1、细胞标本置于载玻片上；
2、固定：建议使用95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林固定液固定10分钟；
3、稍水洗，载玻片上加1%Triton X-100试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
4、根据第一抗体的要求，对细胞进行相应的抗原修复；
5、如有必要，每张载玻片上加过氧化物酶阻断试剂，室温下孵育10分钟，PBS冲洗3x3分钟；
6、除去PBS，载玻片上加第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜，PBS冲洗3x3分钟；
7、除去PBS，载玻片上加检测试剂盒（按照试剂盒说明书进行操作），PBS冲洗3x3分钟；
8、除去PBS，根据检测试剂盒选择相应的显色系统，后中性树胶封固。
备注：更好的方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢，再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片，再按照免疫组化染色步骤进行操作。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50-75%。
组织的固定：病理学研究和免疫组化实验中，组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中，使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用，防止细胞自溶等，从而保持组织和细胞内的抗原性，使抗原不失活。
突触蛋白Ⅰ,SYN1,免疫组化试剂盒人具有以下特点：多聚物技术，使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度的敏感性、染色强度，可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色，更适合于生物素含量较高的组织细胞的免疫组化实验；孵育时间短，只需孵育15分钟，使得免疫组化实验时间大为缩短，是医院病理科开展免疫组化实验的理想试剂盒。
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文献和实验1、组织标本：石蜡切片（病理切片和组织芯片）、冰冻切片2、细胞标本：组织印片、细胞爬片、细胞涂片操作步骤 ①石蜡切片制作 1、固定：取组织，用PBS冲洗，放入4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液内固定12 h2、脱水：倒去固定液，用蒸馏水冲洗3次，再用50%酒精冲洗2次，用酒精逐级脱水，70%酒精1天，80%酒精过夜，95%酒精3 h，无水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）各2 h3、透明：1:1无水酒精二甲苯45min，二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）各30min4、包埋：（恒温箱内进行）浸入石蜡，1:1二甲苯石蜡（58℃
CD44变异体V6、V7/8在非小细胞肺癌中的表达及临床意义
肺癌组织及转移淋巴结中的表达。 结果 在肺癌中CD44 v 6 、V 7/8 表达鳞癌多于腺癌(P＜0.01)；在正常肺组织中无表达。淋巴结转移病例中CD44 v 6 33/36(91%)表达阳性，在25例转移淋巴结中24例表达阳性(96%)。CD44 v 6 在Ⅲ～Ⅳ期患者表达高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P＜0.01)。 结论 肺癌组织CD44 v 6 阳性表达对肿癌的组织病理分型、淋巴结转移及临床分期方面有一定的指导意义。 关键词： 白细胞分化抗原44变异体；肺癌；转移 大量
mmol/l Tris-HCl,pH7.4含50mmol/L MgCl2 ;100mmol/Lβ-巯基乙醇、1mg/ml BSA。 （2）缺口平移反应终止液：200mmol/L NaCl;10mmol/l Tris-HCl,pH7.4; 11mmol/L EDTA; 0.5% SDS。 （3）DNaseⅠ:干粉状DNaseⅠ(2000～3000u/mg)溶于20mmol/l Tris-HCl, pH7.5中（1mg/ml）,10μl分装，-20℃保存一年。
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