嘌呤霉素盐酸盐价格

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名称：嘌呤霉素盐*(代"酸")盐价格
品牌：百奥莱博
规格：25mg
产地：国产|进口
英文名：Puromycin Dihydrochloride
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种*基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是*酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

CAS：58-58-2
分子式：C22H29N7O5·2HCl
分子量：544.43
纯度（Purity, HPLC）：＞98%
外观：白色至米白色粉末
储存条件：-20℃，有效期2年
结构式：


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·pUM19-T Vector TA克隆载体
编号：SY0295
规格：1μg
pUM19-T载体是一种用于PCR产物高效克隆（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。经特殊工艺改造后，使其具有较高的克隆效率：

1）特殊的纯化方式使得超过99% 的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。
2）由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’ 端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。
3）pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。

产品组份：
pUM19-T Vector (50 ng/μl)————20 μl
500 bp control insert (50 ng/μl)————20 μl

使用说明
1. 将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。
2. 按下表配制连接反应体系：

 

ddH2O	To 10 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1μl (约0.025 pmol)
插入片段*	0.075 pmol～0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。
3. 对照反应体系（可选）：

ddH2O	6 μl
10×Ligase Buffer	1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)	1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)	1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)	1 μl

4. 轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5. 转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90s后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10min。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 连接使用的PCR 片段3’ 端应带有A 末端；Pfu DNA Polymerase (SY0036)等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。
3) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

附1：pUM19-T 载体结构


储存条件：-20℃。


嘌呤霉素盐*(代"酸")盐价格关键词：Puromycin Dihydrochloride,嘌呤霉素盐*(代"酸")盐,58-58-2


·DH5α化学感受态细胞
编号：SY0012
英文名称：DH5α Chemically Competent Cell
规格：100μl×10管
本品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。本品适用于蓝白斑筛选，另对recA1和endA1进行特定的改造使其更能保证克隆DNA的稳定性。

DH5α感受态细胞基因型：F-φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-arg ) U169 endA1 recA1 hsdR17 (rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1。

储存条件：-80℃
组份：
DH5α感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

使用方法
1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。
3）将离心管置于42℃水浴中放置45s~60s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2min，该过程不要摇动离心管。
4） 向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min~60min（150 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。
5）将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。
【注】：涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之内可重新涂板。


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·一氧化*(代"氮")检测探针
编号：SY0595
英文名称：DAF-FM DA Solution (5mM in DMSO)
规格：100T
本品为溶解于DMSO的淡黄色溶液，浓度为5mM。本品适用于检测细胞内的一氧化*(代"氮")水平，推荐工作浓度为1-10µM。如果收集细胞后再装载探针，通常至少可以检测100个样品。

DAF-FM DA即4-Amino-5-Methylamino-2,7-Difluorofluorescein Diacetate，也称DAF-FM Diacetate，是最新一代用于一氧化*(代"氮")（nitric oxide, NO）定量检测的探针，其检测原理为：DAF-FM DA可以穿过活细胞膜（cell-permeable），进入细胞后可以被胞浆内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM。DAF-FM本身仅有很弱的荧光，光量子约0.005，但在与NO反应后生成荧光素-*骈三氮唑（benzotriazole），发强烈绿色荧光，光量子约0.81。Ex~495nm，Em~515nm。任何可以检测荧光素（fluorescein）的仪器，包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。

DAF-FM DA是最新一代NO检测探针，与以往最成功且应用最广泛的一氧化*(代"氮")荧光检测探针DAF-2 Diacetate相比较，具有多方面的改进：1）DAF-FM DA和NO加合反应形成的荧光产物在pH5.5以上不受pH影响；2）DAF-FM DA和NO加合反应形成的产物荧光更加稳定，不容易淬灭，这样更加便于检测；3）DAF-FM DA对一氧化*(代"氮")的检测灵敏度更高，其最低检测浓度可达到3nM，而DAF-2 Diacetate的最低检测浓度约为5nM。

CAS：254109-22-3
分子式：C25H18F2N2O7
分子量：496.42
纯度：＞98%
储存条件：-20℃避光，有效期12个月
结构式

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