北京现货AFP1-Luc荧光素酶报告基因质粒库存

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京现货AFP1-Luc荧光素酶报告基因质粒库存在内的细胞生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京现货AFP1-Luc荧光素酶报告基因质粒库存
英文名：AFP1 Luciferase Reporter Plasmid
编号：SY0116
规格：1μg
产地：国产|进口
AFP1-Luc荧光素酶报告基因质粒（AFP1 luciferase reporter plasmid）是用于检测AFP1转录活性水平为目的的报告基因。

AFP1-Luc荧光素酶报告基因质粒主要应用于Hepatoma Nuclear Factor信号通路、药物研究以及细胞中AFP1的调控机制的研究。

pGM AFP1-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个AFP1结合位点，可以高灵敏度地检测AFP1的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得AFP1报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



使用说明
pGMAFP1-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

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·12%预制胶，12孔
编号：SY0374
英文名称：Precast Protein Gels, 12%, 12 wells
规格：1盒（10块）
本品通过pH中性缓冲液制备，丙*(代"烯")酰胺与甲叉丙*(代"烯")酰胺配比是29：1，其规格为浓缩胶5%，分离胶12%，胶板尺寸10×8cm，凝胶厚度1 mm，12孔梳齿，单孔最大上样量30 µl。电泳及转膜缓冲液使用传统的tris-glycine缓冲液，蛋白条带直且尖锐。本品兼容Biorad，天能及北京六一的mini胶电泳槽及其他任何胶板宽度在10 cm的电泳槽。

N,N-亚甲基双丙*(代"烯")酰胺（甲叉丙*(代"烯")酰胺）交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。与传统实验室自行配制凝胶相比，使用预制胶具有以下优点：1）即开即用，不用再配制N种溶液、灌胶、等胶凝固，节省了宝贵的时间和精力；2）不用接触几种具有积累性神经毒性的试剂（丙*(代"烯")酰胺/甲叉丙*(代"烯")酰胺：神经毒性和遗传毒性；TEMED：强神经毒；过硫*(代"酸")铵：可严重损伤呼吸道，眼睛，皮肤）；3）大规模生产，胶与胶之间重复性好，质量稳定，不像手工灌胶那样结果差异大。

使用方法

1）剪开包装取出胶，撕去胶板底端胶纸，将预制胶固定在电泳槽中，加入电泳缓冲液没过梳齿部位，双手按住梳子左右部位将其平稳缓慢（一定要慢，否则会将胶齿拔断或拔歪）拔出，在前后板的上方中央卡上一个“V”型卡（通过加固前后板，不仅可防止枪头上样用力过猛撬开两板产生缝隙，还可稳定跑胶质量，电泳过程中“V”型卡不可取出），上样后进行电泳，电泳后取出胶板，用镊子或小螺丝刀沿左右两板间的缝隙将两板别开，将胶取出，弃去塑料板。
2）电泳：使用《分子克隆》指定的 tris-glycine电泳缓冲液（tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0.1%）。推荐使用低压100V，15min换高压150V跑至电泳结束。
3）转膜：使用《分子克隆》的 tris-glycine 电转缓冲液（含 20%甲醇或乙醇），操作与实验室原有操作完全相同。

储存条件：4℃，有效期一年。

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本品含有的部分试剂如丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺有毒，对人体有害，请注意适当防护。
3）电泳及电转缓冲液建议使用新配制的缓冲液，试剂纯度不够，反复使用或长期放置过的缓冲液会降低电泳效果。传统《分子克隆》的tris-glycine 电泳及电转缓冲液是不用 NaOH 和 HCl 调整 pH ，因为引入的*离子和*离子会影响电泳效果。
4）电泳前请务必撕去胶板底端的胶纸，否则电路不通，无法电泳。
5）拔梳子时最好浸没在电泳缓冲液中拔，一方面由于液体润滑梳子更容易拔，另一方面不会产生气泡。另外拔梳子时越慢越好，如此可防止梳齿被拔断或拔歪。
6）在电泳后开板取胶时，用小号一字螺丝刀或中号镊子插入左右两板间缝隙，用力搬动，两板即可应声分开，此时两板底部还不能分开，要通过掰开两板取出凝胶。
7）在上样前，使用“V”型卡加固前后板（加样和电泳过程“V”型卡不可移动或拔出），使用时只需将一个“V”型卡“轻轻地”（不必卡到底，不掉即可）卡在前后板的上端中间区域，可确保上样不会产生板胶间的缝隙从而导致样品泄露，电泳时“V”型卡不必取出如此可有助于稳定跑胶质量。
8） 本预制胶对于Biorad和天能的电泳内外槽存在微小泄露，可通过两种方式解决本问题：一是内槽加满缓冲液，外槽液面加至距内槽液面3-5mm，从而可防止在电泳过程中内槽液面逐步下降。另一种解决方式是将Biorad的硅胶封闭垫取出后反过来安装，使其没有凸起的平滑面朝外，从而防止漏液。


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·嘌呤霉素盐*(代"酸")盐
编号：SY0607
英文名称：Puromycin Dihydrochloride
规格：25mg
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种*基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是*酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

CAS：58-58-2
分子式：C22H29N7O5·2HCl
分子量：544.43
纯度（Purity, HPLC）：＞98%
外观：白色至米白色粉末
储存条件：-20℃，有效期2年
结构式：



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·腔肠素h
编号：SY0235
英文名称：Coelenterazine h
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素h（Coelenterazine h），是海肾荧光素酶（Rluc）和Gaussia荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物，其发光强度比天然腔肠素高10倍以上，适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子，可用于检测活细胞中*离子浓度。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点，
1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。

英文别名：2,8-Dibenzyl-6-(p-hydroxyphenyl)-imidazo[1,2a]pyrazin-3-(7H)-one; 2-Deoxycoelenterazine; CLZN-h; h-CTZ
CAS：50909-86-9
分子式：C26H21N3O2
分子量：407.48 g/mol
熔点：142℃±2℃(dec)
UV：l max: 433 nm ± 2 nm
外观：浅黄色至橘色粉末
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
纯度：＞99%（TLC）
结构：


运输和保存方法：冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体下以避免接触空气。

注意事项

1）腔肠素h粉末或者储存液最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素h氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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