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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
932
- 英文名:
RIPA Lysis Buffer (Strong)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货RIPA裂解液(强)销*(代"售")由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研目的生化试验项目,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多RIPA裂解液(强)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:北京现货RIPA裂解液(强)销*(代"售")
英文名:RIPA Lysis Buffer (Strong)
品牌:百奥莱博
规格:100ml
编号:SY0302
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。
本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液(强),含有sodiu*(代"m") orthovanadate,sodiu*(代"m") fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
注意事项
1)需自备PMSF。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
使用说明:
(一) 培养细胞样品:
1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3)按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注】:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
更多有关北京现货RIPA裂解液(强)销*(代"售")的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·核糖核酸酶A(来源于牛胰腺)
编号:SY0007
英文名称:Ribonuclease A (RNase A) from bovine pancreas
规格:100mg
核糖核酸酶A(Ribonuclease A,常用缩写RNase A),一种含4个二硫键的单链多肽,分子量约为13.7kDa(*基酸序列)。作为一种核糖核酸内切酶(endoribonuclease),特异性降解单链RNA上的胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)残基。具体来说,切割识别的是由某核苷酸上的5’-核糖和相邻的嘧啶类核苷酸3’-核糖上磷酸基团形成的磷酸二酯键,从而使得2’, 3’-环磷酸水解为对应的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG经RNase A切割产生pG-pG-pCp 和A-PG)。RNase A切割单链RNA活性最高,推荐工作浓度为1-100μg/ml,兼容于各种反应体系。低盐浓度(0-100mM NaCl),可用来切割单链RNA,双链RNA,以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。然而,高盐浓度(≥0.3M),RNase A仅特异性切割单链RNA。
核糖核酸酶A(RNase A)最常见的应用在于质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA,此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一,可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。另外,本品还可用于RNA酶保护分析、RNA序列分析等分子生物学实验。
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·JC-10荧光探针(线粒体膜电位荧光探针)
编号:SY0490
规格:1mg
线粒体膜电位荧光探针JC-10是JC-1的升级产品,同样可用于检测线粒体膜电位的变化。因JC-1虽然在许多实验中被广泛应用,但是其水溶性很差,即使在1 μM浓度的条件下,JC-1也会在水的缓冲液中析出。而JC-10具有更好的水溶性,可以在某些需要高浓度染料的实验中替代JC-1。
正常细胞内,JC-10选择性聚集在线粒体基质中形成可逆的红色荧光聚合物(Ex=540 nm, Em=590 nm);不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失,JC-10由多聚体转变为单体形式存在于胞浆中,产生绿色荧光(Ex=490 nm, Em=525nm)。JC-10不仅可用于定性检测,因颜色的变化可以非常直接的反映出线粒体膜电位的变化。也可以用于定量检测,因线粒体的去极化程度可以通过红/绿荧光强度的比例来衡量。这两种颜色的变化可以用流式细胞仪上的标准滤光器检测到,绿色荧光可用FL1通道分析,红色荧光可用FL2通道分析。除了用于流式细胞术,也可以用于荧光成像和荧光酶标板检测平台。
在一些细胞系中JC-10有着比JC-1更好的表现。不过,JC-10的性能表现极具细胞依赖性特征。
| 分子式 | C25H27Cl2IN4 |
| 分子量 | 583.34 |
| 纯度 | >95%(HPLC) |
| 外观 | 红色粉末 |
| 溶解性 | 溶于DMSO |
| 荧光光谱 | 单体形式(monomer form):Ex=490 nm, Em=525 nm 聚合物形式(J-aggregate form):Ex=540 nm, Em=590 nm |
注意事项
1)JC-10是光敏感性的,所有染色步骤的操作过程中避免强光接触。
2)JC-10染色完成后,立即进行后续的结果分析非常必要;
3)了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:-20℃干燥避光,有效期一年。
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血液基因组DNA提取系统(0.1-20ml)
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司盘40 dCTP,3Na 26266-57-9
ARB14142 人过氧亚硝基(ONOO)血清中含量检测
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文献和实验2,左条带为使用普通强裂解液提取的蛋白样品,右条带为柱式法提取的蛋白样品,可见使用柱式法法提取的样品胶孔中可明显改善样品滞留、拖带的情况发生。 图 2:同种样品分别使用裂解液法和柱式法进行 WB 样品制备,SDS-PAGE 电泳后考染图 图片来源:英文特 WB 蛋白样品制备过程中出现样品粘稠的情况并不代表样品提取失败,而是样品裂解较为充分的表现,但是如果放任不管则会引发一系列连锁效应,最终导致 WB 实验失败。选择合适的方法进行处理。成功获得高质量的蛋白样品,是 WB 实验成功必不可少
细胞凋亡是一种在基因控制下的细胞主动死亡过程,通常表现为核浓缩,起皱,膜发泡以及 DNA 片段化。WB 是研究细胞凋亡机理的基本方法之一,但是 WB 也不是谁都能做成功的,因为有可能你的第一步就做错了!用 WB 做细胞凋亡研究样品制备是第一步,样品制备方法至关重要否则会得到错误的结果和结论。样品制备,看你是不是这样做的:自配裂解液或者购买 RIPA,加上样品研磨啊研磨,孵育啊孵育,然后离心扔掉沉淀(RIPA 不可溶组分),取上清(RIPA 可溶组分)进行下游实验。对对对!都是这么做啊,扔
。大家目前最常用的方法是利用溶液法进行蛋白提取(如 RIPA 裂解液),但是往往会在蛋白质提取中产生两个不同的组分,即 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分。通常 RIPA 不可溶性组分被我们直接丢弃忽略。但是已经有文章证实许多蛋白质存在于被丢弃的 RIPA 不可溶性组分中[1,2] 。也就是说利用溶液法提取的并非是完整的总蛋白,而仅仅是一些可溶性蛋白。那使用 RIPA 等溶液法提取的不完整总蛋白做实验,到底会不会影响我们磷酸化蛋白检测和定量研究呢?我们来一起讨论下。Brady 等人中
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