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549
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博生产销*(代"售")的新布尼亚病毒荧光PCR检测试剂盒优惠促销,是高品质的病毒PCR检测试剂盒产品,欢迎的您垂询订购。
名称:新布尼亚病毒荧光PCR检测试剂盒
产地:国产|进口
等级:科研试剂
规格:48次/盒
品牌:百奥莱博
编号:SYA249
一、简介:
本试剂盒用一对新布尼亚病毒特异性引物,结合特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对新布尼亚病毒 RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中新布尼亚病毒的探针报告基团为FAM。
二、用途:
本试剂盒适用于新布尼亚病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
新布尼亚荧光qRT-PCR反应液 1管 960μL/管
酶混合物 1管 48μL/管
阴性对照 1管 250μL/管
阳性对照 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的处理与RNA提取
6.1 样品前处理
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.2g于研磨器中研磨,加入1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL 灭菌离心管中;液体样品,直接取100μL提取。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液、RT-PCR Reaction Buffer、酶混合物,冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光SFTSV反应液 20µL N×20µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 21µL N×21µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照/阳性对照4μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 42℃ for 20 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec
55℃ for 30 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照:不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照:均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值<35的样本为阳性,表明新布尼亚病毒核酸阳性。
(2) Ct值显示为无或Ct值≥38的样本为阴性样本,表明新布尼亚病毒核酸阴性。
(3) 如果35≤Ct值<38,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行新布尼亚病毒 qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明新布尼亚病毒核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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