博卡病毒/偏肺病毒(HMPV)双重荧光PCR检测试剂盒(HB

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括博卡病毒/偏肺病毒(HMPV)双重荧光PCR检测试剂盒(HBocaV)北京厂家现货在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：博卡病毒/偏肺病毒(HMPV)双重荧光PCR检测试剂盒(HBocaV)北京厂家现货
品牌：百奥莱博
等级：科研试剂
规格：48次/盒
产地：国产|进口
编号：SYA189
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中偏肺病毒/博卡病毒的特异性检测。适用于偏肺病毒/博卡病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

本试剂盒用一对偏肺病毒型特异性引物，一对博卡病毒型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR 技术对偏肺病毒/博卡病毒RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中偏肺病毒型的探针报告基团为FAM，博卡病毒型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
偏肺病毒/博卡病毒反应液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX)	1管	576μL/管
qRT酶混合物(qRT Enzymes MIX)	1管	192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water)	1管	500μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
偏肺病毒/博卡病毒阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集：
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
➤血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
➤血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
➤拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
➤病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。

二、RNA提取：
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	12µL	N×12µL
酶混合物	4µL	N×4µL
总量	16µL	N×16µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入16μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC)4μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	反转录(Reverse Transcription)	1循环	50℃ for 30 min
预变性	1循环	95℃ for 5 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 10 sec 55℃ for 45 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测HMPV，VIC/HEX/JOE基团检测HBocaV。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
➤阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
3．结果判定
➤FAM通道：Ct值≤35HMPV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HMPV核酸阴性。
Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HMPV核酸阳性；否则判为样本阴性。
➤VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 HBocaV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HBocaV核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HBocaV核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
➤PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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·猪伪狂犬野毒病毒(PRV-gE)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA413
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

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规格：48次/盒

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编号：SYA364
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对禽J亚型禽白血病病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用一步法荧光RT-PCR技术对禽J亚型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中禽J亚型禽白血病病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
该试剂盒适合于检测的全血、带有白血细胞的血浆或血清、脾脏、肝脏、肾脏等样本中禽J亚型禽白血病病毒(ALV-J)的特异性检测。适用于禽J亚型禽白血病病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
禽J亚型禽白血病荧光qRT-PCR反应液(ALV-J-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(ALV-J-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(ALV-J-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(ALV-J-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(ALV-J-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明ALV-J核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明ALV-J核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行ALV-J qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明ALV-J核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。




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