禽流感H9N2病毒双重荧光PCR检测试剂盒北京现货促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括禽流感H9N2病毒双重荧光PCR检测试剂盒北京现货促销在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：禽流感H9N2病毒双重荧光PCR检测试剂盒北京现货促销
规格：48次/盒
产地：国产|进口
编号：SYA160
等级：科研试剂

禽流感H9N2病毒双重荧光PCR检测试剂盒北京现货促销正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·新城疫病毒(NDV)通用型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA344
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
新城疫病毒实时荧光qRT-PCR检测试剂是按照美国农业部(USDA)的国际检测标准而制备的商业化检测试剂盒。本试剂盒为中的探针报告基团为6-FAM，淬灭基团为MGB。

二、用途：
本试剂盒适用于检测禽类喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各种组织样品、尿囊液及细胞培养液等。可用于新城疫毒株感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(50T/Kit)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(NDV-qRT-PCR MIX) 1管 700μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(NDV-PTC) 1 管 50μL/管

四、储存条件及有效期
本试剂盒于-18℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照国家标准《新城疫诊断技术》(GB/T 16550-2008)和《新城疫检疫技术规范》(SN/T 0764-2011)进行样品的采集。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
（1） 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
（2） 每管加入600 µL裂解液，分别加入被检样本200 µL，再加入200 µL*仿，混匀器上振荡混匀5 s，于4℃ 12000r 离心15 min。
（3） 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，加入-20℃预冷400µL异丙醇，吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中，避免吸出中间层，颠倒混匀。
（4） 于4℃ 12000 r离心15min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体；加入600µL 75％预冷乙醇，洗涤。
（5） 于4℃ 12000 r离心10min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体。室温干燥5 min～10 min。
（6） 加入10µL无核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r离心5 s，冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 19 µL N×19 µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 20 µL N×20 µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入20μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(NDV -PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 5 min
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR 扩增 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(NDV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明NDV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明NDV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行NDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明NDV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·猪种布鲁氏菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA118
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·高致病性猪蓝耳病毒(hp-PRRSV)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA560
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·鼠源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA297
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·人副流感病毒3型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA176
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·登革热病毒通用单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA224
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·轮状病毒(ROV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA465
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·鸭源性成分单重荧光PCR检测试剂盒(定量)
编号：SYA302
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·高致病性禽流感H5N2病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA154
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·恶性疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA123
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对恶性疟原虫特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR 探针技术进行恶性疟原虫的检测。

二、用途：
本试剂盒可用于恶性疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置，还可用于恶性疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)

 

组份	数量	规格
恶性疟原虫荧光PCR反应液(qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(DNA Polymerase MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
恶性疟原虫阳性对照(PTC)	1管	50μL/管

四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列，Bio-Rad 系列，Roche 系列等荧光定量PCR 检测仪等。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃保存，避免反复冻融，有效期为6个月。

六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液：用一次性无菌5ml 注射器抽取疑似人或动物血3-5ml，置于枸橼酸*或EDTA2Na 抗凝管中，摇匀送检。
肺脏等组织：取上述组织1g左右，置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本：取相应标本3-5ml，转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本：直接取200μl 抗凝血，转至一洁净的1.5ml 离心管中，加入1ml 双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm 离心5min，弃上清，至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13000rpm 离心5min，弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织：剪取约0.1g 组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本：取标本2-3mL，13000rpm 离心3min，弃上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl进行PCR 反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(恶性疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明恶性疟原虫核酸阴性。
如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行恶性疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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