北京口蹄疫O型荧光PCR检测试剂盒(FMDV-O)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括北京口蹄疫O型荧光PCR检测试剂盒(FMDV-O)厂家在内的动物疫病PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：北京口蹄疫O型荧光PCR检测试剂盒(FMDV-O)厂家
产地：国产|进口
编号：SYA480
规格：48次/盒
等级：科研试剂

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·转基因植物NOS终止子单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA266
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·木瓜转基因PRSV CP单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA286
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪乙型脑炎抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA639
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·玉米转基因GA21单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA271
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·轮状病毒A/B分型双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA220
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·空肠弯曲菌/结肠弯曲菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA100
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒(229E)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA183
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒(OC43)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA181
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感通用型和新城疫病毒(AIV-M和NDV)通用型(二合一)荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA371
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·脊髓灰质炎病毒3型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA207
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·风疹病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA248
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·锦鲤疱疹病毒(KHV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA514
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·炭疽芽胞杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA121
等级：科研实验专用
规格：48次/盒


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·猪蓝耳病毒抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA628
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·猪流行性腹泻(PEDV)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA567
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·转基因植物NOS终止子单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA266
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·牛布氏杆菌病ELISA检测试剂盒(间接法)
编号：SYA650
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·恶性疟原虫单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA123
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对恶性疟原虫特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR 探针技术进行恶性疟原虫的检测。

二、用途：
本试剂盒可用于恶性疟原虫检测鉴定及突发公共卫生事件的处置，还可用于恶性疟原虫的环境监测、卫生检疫及感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)

 

组份	数量	规格
恶性疟原虫荧光PCR反应液(qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(DNA Polymerase MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
恶性疟原虫阳性对照(PTC)	1管	50μL/管

四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列，Bio-Rad 系列，Roche 系列等荧光定量PCR 检测仪等。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃保存，避免反复冻融，有效期为6个月。

六、实验操作步骤
6.1 标本采集
血液：用一次性无菌5ml 注射器抽取疑似人或动物血3-5ml，置于枸橼酸*或EDTA2Na 抗凝管中，摇匀送检。
肺脏等组织：取上述组织1g左右，置于1.5ml洁净EP管中送检。
乳液、体液等标本：取相应标本3-5ml，转至1.5ml洁净EP管中送检。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
血液样本：直接取200μl 抗凝血，转至一洁净的1.5ml 离心管中，加入1ml 双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm 离心5min，弃上清，至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复上述步骤一次)。加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13000rpm 离心5min，弃上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
肺、淋巴结等固体组织：剪取约0.1g 组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50μl 转移到1.5mL 离心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl 进行PCR 反应。
乳液等液体标本：取标本2-3mL，13000rpm 离心3min，弃上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀)并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm 离心3min，取上清4μl进行PCR 反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 PCR 扩增
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(恶性疟原虫-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
阳性对照(PTC)：均产生扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性。
Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明恶性疟原虫核酸阴性。
如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行恶性疟原虫real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明恶性疟原虫核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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·博卡病毒(HBocaV)/偏肺病毒(HMPV)双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA189
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中偏肺病毒/博卡病毒的特异性检测。适用于偏肺病毒/博卡病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

本试剂盒用一对偏肺病毒型特异性引物，一对博卡病毒型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR 技术对偏肺病毒/博卡病毒RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中偏肺病毒型的探针报告基团为FAM，博卡病毒型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。

试剂盒组成：

组份	数量	规格
偏肺病毒/博卡病毒反应液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX)	1管	576μL/管
qRT酶混合物(qRT Enzymes MIX)	1管	192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water)	1管	500μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
偏肺病毒/博卡病毒阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集：
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
➤血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
➤血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
➤拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
➤病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。

二、RNA提取：
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(HMPV/HBocaV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	12µL	N×12µL
酶混合物	4µL	N×4µL
总量	16µL	N×16µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入16μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC)4μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	反转录(Reverse Transcription)	1循环	50℃ for 30 min
预变性	1循环	95℃ for 5 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 10 sec 55℃ for 45 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测HMPV，VIC/HEX/JOE基团检测HBocaV。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
➤阳性对照(HMPV/HBocaV-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
3．结果判定
➤FAM通道：Ct值≤35HMPV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HMPV核酸阴性。
Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HMPV核酸阳性；否则判为样本阴性。
➤VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 HBocaV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HBocaV核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HBocaV核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
➤PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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