北京现货肺炎支原体/肺炎衣原体双重荧光PCR检测试剂盒供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的北京现货肺炎支原体/肺炎衣原体双重荧光PCR检测试剂盒供应，是高品质的细菌PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：北京现货肺炎支原体/肺炎衣原体双重荧光PCR检测试剂盒供应
规格：48次/盒
等级：科研试剂
编号：SYA052
产地：国产|进口
一、简介：
本试剂盒用一对犬细小病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对犬细小病毒核酸进行体外扩增检测，用于对可疑感染病犬的病原学诊断。

二、用途：
本试剂盒适用于检测咽拭子、痰液，肺、淋巴结等组织以及血清等标本中肺炎支原体(MP)和肺炎衣原体(CP)DNA，适用于肺炎支原体和衣原体感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)

 

名称	数量	规格
核酸提取液	2管	1.5ml/管
Taq 酶系	1管	50μl/管
qPCR MIX	1管	1.0ml/管
阳性质控品	1管	50μl/管
阴性质控品	1管	250μl/管

四、荧光PCR 仪器适用范围：取得资格认证的荧光定量PCR仪。

五、储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。

六、样本采集及运输：
1. 适用标本：咽拭子、痰液、组织、血液等。
2. 标本采集：
痰液：取受检者深部痰液2-3ml置入5ml离心管，密闭送检。
咽试子：受检者生理盐水漱口，无菌咽试子粘取深部痰液，置入5ml离心管，密闭送检。
灌洗液：取待检者肺灌洗2-3ml，置于5ml离心管，密闭送检。
其他标本：取发病动物血液、组织等标本立即送检。
3. 保存运输：标本建议立即送检，如果需要保存建议于-20℃或者-80度保存，不超过6个月。避免反复冻融。标本运送时应采用0℃冰壶。

七、检测步骤：
1. 核酸提取
1.1 痰液或灌洗液：将痰液或灌洗液充分混匀，取0.5ml转至1.5ml干净离心管，加入等体积4%NaOH，充分混匀，室温放置10min，12000rpm离心5分钟，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液，充分混匀，100℃处理10分钟，12000rpm离心5分钟，取上清液4μl做PCR反应。
1.2 咽试子：取1ml生理盐水加入5ml离心管，充分洗涤咽试子，将洗涤液转至1.5ml干净离心管中，13000rpm离心5分钟，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液，充分混匀，100℃处理10分钟，12000rpm离心5分钟，取上清液4μl做PCR反应。
1.3 固体组织：剪取约0.5g组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入TE0.5ml转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50ul转移到1.5ml离心管中，加入50μl核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀) 并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清4μl进行PCR反应。
1.4 其他液体标本(培养物或血清等)：取标本1-2ml，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀加入50μl核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀) 并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清4μl进行PCR反应。
上述标本也可以选用取得资格认证的商业化试剂盒提取DNA。
2．PCR扩增
从试剂盒中取出qPCR MIX、Taq酶系室温融化并振荡混匀后，瞬时离心。设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
计算好各试剂的使用量，在一个灭菌洁净离心管中充分混匀，瞬时离心，向设定的N个PCR反应管或反应板中加入21μl上述试剂，然后再分别加入4μl 提取的待测样品、阳性质控品和阴性质控品，瞬时离心。放入荧光定量PCR仪器的反应槽内，按对应顺序设置阳性质控品、阴性质控品以及待测样品，并设置样品名称、报告基团设置为FAM和HEX(或JOE或VIC)，其中FAM基团检测肺炎支原体，HEX(或JOE或VIC)基团检测肺炎衣原体，淬灭基团为TAMRA。
推荐扩增条件为：94℃→2分钟，后94℃ 30秒→55℃ 45秒(采集荧光)，40个循环。
基线调整取6-15个循环的荧光背景信号，阈值设定原则上以阈值线刚超过阴性质控品的检测荧光曲线的最高点。
3. 结果分析判定
反应结束后，针对FAM和HEX(或JOE或VIC)双通道，使用手动调整阈值使阴性质控品Ct 值均在40以上，Ct 值小于35的为阳性；Ct 值在35-40之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验之后，如果Ct 值仍然在35-40之间，判断为阴性。
其中FAM通道为肺炎支原体检测结果，HEX(或JOE或VIC)通道为肺炎衣原体检测结果。
4. 质控标准
阴性质控品：CT值均显示UNDET或者CT=40，即结果为阴性；
阳性质控品：Ct 值均应小于 30，且呈标准“S”型扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。

八、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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·志贺氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA256
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·西尼罗病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA230
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·玉米特异性基因Invertase单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA289
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒/博卡病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA190
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对冠状病毒型特异性引物，一对博卡病毒型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR 技术对冠状病毒/博卡病毒RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中冠状病毒型的探针报告基团为FAM，博卡病毒型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中冠状病毒/博卡病毒的特异性检测。适用于冠状病毒/博卡病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
冠状病毒/博卡病毒反应液(HCOV/HBocaV-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
冠状病毒/博卡病毒阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(HCOV/HBocaV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 12µL N×12µL
酶混合物 4µL N×4µL
总量 16µL N×16µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入16μL，向每管中加处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC)4μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 30 min
预变性 1循环 95℃ for 5 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测HCOV，VIC/HEX/JOE基团检测HBocaV。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
(2) 阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
8.3 结果判定
(1) FAM通道：Ct值≤35HCOV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HCOV核酸阴性。
Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HCOV核酸阳性；否则判为样本阴性。
(2) VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 HBocaV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HBocaV核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HBocaV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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