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- 百奥莱博
- SYA309-BYI
- 北京
- 2025年07月08日
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名称：鹅源性成分荧光PCR检测试剂盒(定量)厂家现货
品牌：百奥莱博
规格：48次/盒
编号：SYA309
等级：科研试剂
产地：国产|进口
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文献和实验，遇到探针，利用Taq酶5`—3`外切酶活性将探针水解成单个碱基，单个碱基之间距离较远，第一个染料的能量无法传给第二个染料，只好通过发射特征光子回到稳定态，通过对溶液中第一个染料的荧光检测获得信号。这种试剂检测模式增加了检测信号的特异性，但是由于利用了Taq酶5`—3`外切酶活性，一般试剂厂家只给Taq酶的聚合酶活性定标，没有同时给Taq酶5`—3`外切酶活性定标，不同批号试剂之间会给定量带来差异。另外对探针的熔点温度（Tm）仅要求其高于60°C，这就使不同试剂盒之间的特异性参差不齐，而且无法做质控
在相同的模板、引物和反应体系下，用ABI7000荧光定量PCR仪也进行了其荧光定量产品和国际知名厂家A品牌，以及T品牌相关产品的对比实验。 实验材料 小鼠肝脏组织 实验方法 RNA提取：BioTeke RNApure高纯总RNA提取试剂盒，操作步骤请参考说明书。 目的基因：小鼠管家基因β–actin cDNA制备：测定小鼠肝脏总RNA浓度后，使用BioTeke Super RT Kit 制备20μl cDNA.操作步骤参照试剂盒说明书。 二步法荧光定量PCR： 小鼠
此种技术的策略是用一种竞争模板与靶序列cDNA同时扩增，使用同样的引物经过PCR扩增之后，能将这些靶cDNA区别开来。竞争模板是一种突变的靶cDNA，它的突变位点为一个新的限制性内切酶位点，这种突变体能够很容易地用PCR定点诱变来得到。也有利用基因组质粒DNA作为竞争模板，在紧靠一小段(10～200bp)内含子序列的两个外显子上选择寡核苷酸引物，按照靶cDNA的长短区分扩增竞争模板的方式进行的，但它的扩增效率可能不如cDNA扩增效率高。扩增之前可以精确定量竞争cDNA模板的浓度
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