北京封闭绵羊血清(原液)促销

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名称：北京封闭绵羊血清(原液)促销
产地：国产|进口
规格：10ml
编号：QN1243
英文名：Normal Sheep Serum
封闭血清适用于免疫组化或者免疫荧光实验中样本的封闭。可以封闭待检样本中与蛋白质非特异性结合的位点，另外还可以封闭样品中内源性的Fc片段结合位点，阻断抗体与样品中的Fc受体结合，从而降低背景，减少假阳性。在选择封闭血清时，要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白，且封闭血清来源不能与一抗来源相同，可用与二抗相同来源的封闭血清。

使用方法：
使用时，用PBS(0.01mol/L pH7.2-7.4)将封闭血清原液稀释10或20倍，配成10%或者5%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。

储存条件：-20℃

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·核蛋白提取试剂盒
编号：QN1079
英文名称：Nuclear Protein Extraction Kit
规格：50T|100T
本核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100个样品(每个样品约2×106个Hela细胞或40mg组织)。

体外培养细胞的操作方法(裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行)：

1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱*酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞(最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白)。500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20μl细胞沉淀加入200μl浆蛋白抽提试剂(2×106个细胞沉淀的体积约20μl或40mg)。
5．用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)，必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃，12000～16000g离心10分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE、Western等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
9．沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清(避免细胞浆蛋白的污染)，加入50-100μl核蛋白抽提试剂。
10．用移液器吹打或高速涡旋15秒(可适当延长)至沉淀完全分散，冰浴10分钟。
11．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃，12000～16000g离心10分钟。
12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。 对于组织样品：把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每50mg组织加入200μl～500μl PBS，用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液，500g离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入200μl浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。

注意事项：
1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号QN1075)测定蛋白浓度。
2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20℃保存。


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