BTN130648型Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶价格厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN130648型Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶价格厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BTN130648型Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶价格厂家
英文名：Afu Uracil-DNA Glycosylase
编号：BTN130648
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶(Afu UDG)是E.coli尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)热稳定的同源蛋白，来源于闪烁古生球菌。该酶从含尿嘧啶的DNA上催化释放尿嘧啶，能有效地水解双链和单链DNA上的尿嘧啶。其反应示意图如下：


产品特点：
1．热稳定；
2．从双链或单链DNA上切下尿嘧啶。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指每分钟从含尿嘧啶双链DNA上催化释放60pmol尿嘧啶所需要的酶量。

关于BTN130648型Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶价格厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·Southern级植物DNA提取试剂盒
编号：BTN130940
英文名称：Plant DNA extraction kit(Southern Grade)
规格：10次

·96孔板病毒RNA提取试剂盒(真空法)
编号：BTN131191
英文名称：Virus RNA extraction kit with 96-well plate(Vacuum method)
规格：1次

·两性霉素B
编号：BTN120681
英文名称：Amphotericin B Solution
规格：1mL
本品为浓度为20mg/mL两性霉素B的水溶液。两性霉素B(二性霉素B；节丝霉素B；Fungizone)分子式：C47H73NO17，分子量：924.08，CAS号：1397-89-3，可溶性两性霉素B系来自链霉菌的多烯抗真菌类抗生素，它与真菌细胞膜的固醇类物质，特别是麦角固醇有亲和性，在膜上形成通道，使一些小分子流失。抗菌谱为真菌和酵母，多用于细胞培养。在日光下易被破坏失效。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存，有效期6个月。

·细胞蛋白质-RNA共提试剂盒
编号：BTN130829
英文名称：Cells total RNA and total protein co-extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在同一样品中同时高效快速提取总RNA和总蛋白的试剂盒。本试剂盒的操作过程不用使用*酚、*仿，使用本试剂盒提取的Total RNA和Total Protein可用于siRNA的效果分析、RNA/蛋白质的表达分析等。通常分析经过各种药物处理(或经siRNA Transfection)后的动物培养细胞中的靶mRNA或蛋白质的表达差异时，需要将培养细胞分成2份，或者进行两次培养，一份用于提取Total RNA，另一份用于提取Total Protein，这样实验操作复杂烦琐，实验数据误差较大。本试剂盒可以从同一样品中同时提取Total RNA和蛋白质，方便了实验操作，提高了实验可信度。其实验流程如下：

本试剂盒使用含非离子性表面活性剂的Cell Lysis Buffer裂解细胞，然后使用盐析法将染色体DNA和细胞残渣除去。实验操作只需15分钟，便可以从1×103～1×107个培养细胞中制备含Total RNA和Total Protein的可溶性溶液，此溶液可直接用于蛋白质电泳和Western Blotting分析等。此溶液经Isopropanol沉淀回收Total RNA，再经RNA Preparation Water溶解后的Total RNA溶液可用于Real Time RT-PCR法进行mRNA的表达分析等。


BTN130648型Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶价格厂家关键词：Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶,BTN130648,Afu Uracil-DNA Glycosylase


·DNA洗脱液
编号：BTN70705
规格：10mL

·地高*(代"辛")标记dUTP溶液(Digoxin-11-dUTP)
编号：BTN100921
英文名称：Digoxin-dUTP Solution
规格：25μL
本产品是浓度为0.35mM的DIG-11-dUTP。用于PCR、缺口平移、cDNA合成、随机引物标记和引物延伸等标记DNA。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

·His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130530
英文名称：Protease Inhibitor for His-tagged Protein
规格：10mL
His-Ni亲和层析是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，纯化过程中，为防止各种蛋白酶降解重组蛋白，需要加入足够、特异的蛋白酶抑制剂。本产品即为优化的His标签蛋白蛋白酶抑制剂混合液。专门用于纯化His标签蛋白时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止重组表达蛋白质降解。本品抑制谱广，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶、嗜热菌蛋白酶样蛋白酶和*基肽酶等各种蛋白酶活性。本产品为DMSO溶液。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

·T3体外转录试剂盒
编号：BTN91108
英文名称：T3 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于沙门氏噬菌体T3 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T3启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T3启动子下游开始合成与模板DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需耍单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模板DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到5000nt之问。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模板可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA结构研究、核解生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T3 RNA聚合酶混合液	50μL
RNase-free水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点：
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T3启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T3启动子序列(5´AATTAACCCTCACTAAAGG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T3启动子的载体，并且克隆位点必须位于T3启动子下游。
3)是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμl	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
转录预配液，2×	10μl	需室温时使用
T3 RNA聚合酶混合液	1μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他体积的反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要定做NTP分开而不是NTP预先混合的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T3 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录结束后，在反应体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL，
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是DNA模板有RNase污染，测试方法是用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板序列。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T3 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6或T7体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6或T7启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T3 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T3 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。


BTN130648型Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶价格厂家关键词：Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶,BTN130648,Afu Uracil-DNA Glycosylase


·T7体外转录试剂盒
编号：BTN91106
英文名称：T7 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于T7 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T7启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T7启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含T7启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T7 RNA聚合酶	50μL
RNase-free水	1mL
说明书	1份

储存条件：-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
3)需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板		如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA需室温时使用
PCR片段	50ng左右
质粒DNA	1μg左右
阳性对照	4μL
转录预配液，2×	10μL
T7 RNA聚合酶	1μL
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。
4. 取1-3μl电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

三、去除DNA模板(所需试剂可从本公司另购)
1.在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5. 加自备的200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干，所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T7 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。

北京百莱博科技有限公司专业生产工具酶产品，欢迎来电咨询选购BTN130648型Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶价格厂家。