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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
857
- 英文名:
Biotin-HRP
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输,-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应生物素化的辣根过氧化物酶哪里买,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:生物素化的辣根过氧化物酶哪里买
编号:BTN131095
英文名:Biotin-HRP
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本产品为生物素标记的辣根过氧化物酶,其灵敏性高,推荐用于利用亲和素、链亲和素或中性亲和素蛋白的三明治技术。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性单位定义:一个单位定义为在20℃,20秒内从联*(代"*")三酚中产生1μmol焦酚所需的生物素化辣根过氧化物酶的量。
除生物素化的辣根过氧化物酶哪里买外,我公司正在打折促销以下产品:
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生物素化的辣根过氧化物酶哪里买关键词:生物素化的辣根过氧化物酶,BTN131095,Biotin-HRP
·柱式真菌RNA提取试剂盒
编号:BTN80804
英文名称:Fungal RNA Column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是在本公司真菌RNA提取试剂盒(BTN60305)基础上改进的柱式产品,跟真菌RNA提取试剂盒相比,它具有下列特点:
1. 柱式操作,更加简单快捷,整个过程只需要约30分钟。
2. RNA 纯度高,OD260/280一般都在2.0左右,可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA产量高,一般在 20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法,适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌,包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 20ml |
| 溶液B | 25ml |
| 溶液C | 75ml |
| 溶液D | 25ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物,则直接将1-10mL液体真菌在 1.5mL塑料离心管中 12000~15000g离心 1分钟,并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混匀。如果 A溶液存放时产生沉淀,请置于65℃融化,用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B,剧烈振荡 30秒。
4. 65℃保温 5分钟。
5.室温 12000~15000g离心 3~5分钟,转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿,振荡混匀 30秒。
7.室温 12000~15000g离心 3~5分钟,转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清 3倍体积的溶液C(约1.2-1.5mL)和1倍体积的溶液D(约0.4-0.5mL),充分混匀。
9. 将混合液(约2.5mL)分 3-4次转 移 到离 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高,可以再用 0.5mL 通用洗柱液重复此步一次。
12.室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的洗柱液会影响 RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中,加入30-100μL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测:
如果需要做 Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414 ,2000)。 如 果是简 单 检 测 ,可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液,但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques,9:558,1990)。普通 DNA上样液不含变性剂,也没经过去 RNase处理,所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE进行 RNA电泳,因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分,硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应,形成 RNA分子内或RNA分子间的络合复 合物,使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度,电泳条带弥散,同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组 DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关,而 RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反 应,使硼*(代"酸")对 RNA电泳的影响更复杂,所以TBE 对 RNA电泳的影响 没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行,最好是避免使用。
16. RNA产量产率测定:
将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280,否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定:
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间,如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染,但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除,DNA和多糖污染可以分别用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。测 OD时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围。
疑难解答:
Q:为何从酵母中提取的总 RNA 有 3 条小带?
A:它们分别是70bp左右的tRNA,120bp左右的5S RNA,160bp左右的5.8 S RNA。
Q:上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA吗?
A:不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象,百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物加 RNase处理后,这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象,建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶,也必须在上样前使 RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时,可以使用 TAE或超快电泳液 SuperBuffer-2,最好不要使用 TBE缓冲液,因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物,RNA 很难形成锐利的条带。
Q:如何确认和去处除污染的基因组 DNA?
A:如果怀疑有 DNA污染,可以用 RNase处理 RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
生物素化的辣根过氧化物酶哪里买关键词:生物素化的辣根过氧化物酶,BTN131095,Biotin-HRP
·动物细胞裂解液B(变性)
编号:BTN80807B
英文名称:Animal Cell Lysis Solution(B)
规格:100mL
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分,可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞,使之释放出细胞内蛋白,用于后续实验。
产品特点:
1.快速裂解,多种裂解成分经过精心优化,能快速使细胞裂解。
2. 非变性(BTN80807A)产品能最大程度地保留蛋白天然结构和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
3.变性(BTN80807B)裂解细胞的效率更高,主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验,还可以用于Western Blotting。
4.适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
注意事项:
1. 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复合物,可以更有效地抑制蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信号传递研究,最好在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶抑制剂复合物。
3. 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4. 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响,因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。
使用方法:
一:处理贴壁的培养细胞
1. 去除贴壁细胞培养液,用冰浴预冷的PBS 洗两遍,去尽残留的PBS。
2. 将培养板放置在冰上待用。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品(或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL 之间)。
注意:裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1~2×106细胞)需要0.1~0.2mL本产品;25 cm2培养瓶(3~6×106细胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培养瓶(1~2×107细胞)需要1~2mL。对于特别大或特别小的细胞,需要用户摸索最佳用量。
4. 冰上放置10-30分钟(最佳时间跟细胞系相关),其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5. 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端,并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
7. 用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二:处理悬浮细胞
1. 400×g,4℃离心10分钟收集悬浮细胞,弃上清。
2. 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍,步骤同第一步。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品的比例加入本产品,充分悬浮细胞。
4. 冰上放置15分钟裂解细胞,期间偶尔轻柔震荡。
5. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀,最好留20-40μL液体不取。
6. 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
7. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三:处理组织块
1. 称量组织块,用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆,用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2. 将匀浆物转移到离心管中,1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3. 按每50mg 组织加入0.2mL 本产品的比例加入预冷的本产品,吹打混匀,放置冰上。
4. 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次,共4次。
5. 15000×g、4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,最好新鲜使用。
6. 使用前最好先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
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