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Hexadimethrine bromide
28728-55-4
一年
北京百奥莱博科技有限公司
低温运输,4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")基因转染增强剂 细胞及免疫学,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:基因转染增强剂 细胞及免疫学
编号:BTN140621
英文名:Hexadimethrine bromide
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
聚凝胺Polybrene又名为*化己二甲铵、海美*铵,CAS号:28728-55-4。聚凝胺是一种多聚阳离子聚合物,常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强转染效率。Polybrene 增强转染效率原理图如下:
产品特点:
1.Polybrene广泛应用于脂质体转染、逆转录病毒介导的基因转染及慢病毒介导的基因转染等实验,可以显著提高各种逆转录病毒、慢病毒及脂质体的转染效率。
2.Polybrene对某些细胞(如末端分化的神经元,DC细胞)毒性较大,初次应用建议先做毒性测试。
3.Polybrene还是一种有效的抗肝素剂(肝素拮抗剂),常用来生产非特异性凝集的红细胞;还可用于蛋白测序,小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象;PVDF 膜上加入Polybrene能提高膜的亲和性。
储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
慢病毒感染举例:
1.第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃培养过夜。
2.第二天感染前,从-80℃冰箱取出病毒,冰浴融化,参考相关文献或者根据预实验得到的MOI 值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。
注意:轻轻混匀,不要使用振荡器。
3.吸去细胞原有培养基,将按照MOI 稀释好的病毒液+培养基+ Polybrene(对于293细胞,终浓度6μg/mL)加入细胞中,轻轻摇匀。37℃培养过夜。
注:病毒液-培养基-Polybrene 混合液,按如下操作制备混合液:
①添加完全培养基(60mm培养皿2mL,100mm培养皿3mL),37℃预热;
②加入病毒轻轻混匀;
③加入Polybrene 至终浓度为2μg-12μg/mL。
轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI高于20时,建议客户添加Polybrene(终浓度2~12μg/mL,浓度因不同的细胞而异,具体的请参考相关文献)来提高病毒的感染效率。如果感染目的细胞是Jurkat,kasumi,NB4,H929,GBC-SD,MCF-7等,建议不要添加Polybrene;大部分原代细胞感染也不需要添加Polybrene,以上仅供参考。
4.感染48小时后,吸除含慢病毒的培养基,换为新鲜的培养基。
5.继续培养24~48小时后,根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。
质粒转染:
1.第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2 天密度约50%为宜。37℃培养过夜。
2.准备 DNA-培养基-Polybrene混合液。按如下操作制备混合液:
①添加完全培养基(60mm培养皿2mL,100mm培养皿3mL),37℃预热;
②添加10ng~10μg质粒轻轻混匀;
③加入Polybrene 至终浓度为5μg-10μg/mL。
轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
3.去除培养基,在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液,在37℃孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h 轻柔混匀。
4.去除 DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1×HBSS)轻轻盖住细胞(60mm培养皿3mL,100mm培养皿4mL)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s,使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
5.立即去除DMSO shock solution,用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5mL培养液清洗,100mm培养皿每次用10mL培养液清洗。
6.加入完全培养基到细胞中,根据需要进行后续实验。
稳定转化:去除生长培养基,按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。
瞬时表达:去除生长培养基,加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获细胞。
备注:Polybrene的使用浓度依据细胞种类,转染方法等影响,以下使用浓度仅作参考。
1.为提高腺病毒转染效率和LacZ转基因表达,使用6μg/mL Polybrene处理病毒载体后转入BHK-21细胞(MOI为100),转染率提高到95%,没有用Polybrene处理的只有2.3%转染率。
2.在KSHV(Kaposi"s sarcoma-associated herpesvirus)纯化和转染实验中,浓缩的病毒与8μg/mL Polybrene加到BCBL-1细胞中37℃下孵育2h。
3.在逆转录病毒构建研究中,用v-rasHa 逆转录病毒转染角质细胞(Keratinocytes)后在含有4μg/mL Polybrene培养基中培养3天,病毒滴度为1×107 virus/mL,MOI 为1。
4.在shRNA编码的慢病毒载体的转染研究中,病毒上清中加入8μg/mL Polybrene,转染到HEK293细胞中。
5.在慢病毒shRNA转染研究中,将含有6μg/mL Polybrene的新鲜培养基加入到培养24h的RCC10细胞中,用慢病毒颗粒转染细胞。
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基因转染增强剂 细胞及免疫学关键词:28728-55-4,基因转染增强剂,Hexadimethrine bromide
·细菌膜蛋白质微量提取试剂盒
编号:BTN100929
英文名称:Bacterial Membrane Protein Miniprep Kit
规格:50次
本试剂盒是基于超速离心的快速提取细菌膜蛋白的试剂盒。其原理是裂解细胞后,通过超速离心分离出细胞膜和附着的蛋白质。
产品特点:
1.一步式分离细胞膜和膜蛋白,密度梯度离心法简单快捷。
2. 膜蛋白纯度高,能够去除各种胞浆蛋白的污染,也能去除松散附着在细胞膜上的蛋白,所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好,主要是由于实际中有抑制蛋白酶成分。
4. 回收效率高,一般能得到相当于总蛋白量6%的膜蛋白。
5.可用于E.coli,S.typhimurium,K.aerogens,P.aeruginosa,C.crescentus等细菌。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 125ml |
溶液B | 25ml |
溶液C | 250ml |
DNase I干粉 | 3.5mg |
说明书 | 1份 |
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