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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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阴凉干燥
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京3M乙酸*溶液(pH5.2)品牌,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京3M乙酸*溶液(pH5.2)品牌
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:BTN101202
规格:250mL
北京3M乙酸*溶液(pH5.2)品牌极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·木材DNA提取试剂盒
编号:BTN130941
英文名称:Timber DNA extraction kit
规格:50次
·糖原溶液(10mg/mL)(分子生物学级)
编号:BTN131190
英文名称:Glycogen Solution
规格:1mL
本产品为分子生物学级糖原溶液,浓度为10mg/mL,不含DNase,RNase。可直接用作沉淀DNA或RNA的辅助沉淀剂使用。
储存条件:室温运输,4℃保存,有效期一年。
·Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)
编号:BTN120654D
英文名称:Southern DNA Marker DL2000(Labeled by DIG)
规格:20次
本产品为分子生物学级糖原溶液,浓度为10mg/mL,不含DNase,RNase。可直接用作沉淀DNA或RNA的辅助沉淀剂使用。
储存条件:室温运输,4℃保存,有效期一年。
·5´末端同位素标记试剂盒
编号:BTN131036
英文名称:DNA 5´End-Labeling Kit
规格:20次
本产品为DNA 5´末端标记系统,利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和[γ-32P]ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下:

产品特点:
1. 使用本试剂盒之前,不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理,因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行,均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。
试剂盒组份:
| 成分 | 规格 |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 20μl |
| 5×交换反应缓冲液 | 100μl |
| 10×磷酸缓冲液 | 50μl |
| Control DNA | 20μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂:7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液:
| 成分 | 加入的体积 |
| 自备的5´磷酸化DNA片段 | 14μL(≤5 pmoles的5´末端) |
| 5×交换反应缓冲液 | 5μL |
| [γ-32P]ATP | 5μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 灭菌的超纯水 | 补足到25μL |
注:5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5~10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇,-20℃放置30~60分钟。
7.离心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注:通过第5~8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP,如要完全将其除去时,乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时,请在第8 步之后进行。
二、磷酸化反应标记
A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂:TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液:
| 成分 | 加入的体积 |
| 自备的DNA片段 | 133μL(≤10μg) |
| 1M Tris-HCl,pH8.0 | 15μL |
| 牛小肠碱性磷酸酶(CIAP,10~20U/μL) | 2μl |
| 灭菌的超纯水 | 补足到150μL |
3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25:24:1),充分混匀。
5.离心,取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4~5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇,-20℃放置30~60分钟。
9.离心回收沉淀,用 1mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。
B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液:
| 成分 | 加入的体积 |
| 自备的DNA片段 | 20.5μL(≤5 pmoles的5´末端) |
| 10×磷酸缓冲液 | 2.5μL |
| [γ-32P]ATP | 1μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 灭菌的超纯水 | 补足到25μL |
2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。
三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液:
| 成分 | 加入的体积 |
| Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5~10 pmoles) | ≤3μL |
| 10×磷酸缓冲液 | 2.5μL |
| [γ-32P]ATP | 1μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 灭菌的超纯水 | 补足到25μL |
2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。
四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候,需要使用本步骤,即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好,它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5~10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。
注意事项:
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中,使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现,但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时,标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时,标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记,仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时,反应体系中的[γ-32P]ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的[γ-32P]ATP可用[γ-35S]ATP 替代。
使用举例:
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作,取λ-BstP I,λ-Hpa I,λ-EcoT22 I 各3 pmols,用[γ-32 P]ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示:
北京3M乙酸*溶液(pH5.2)品牌关键词:3M乙酸*溶液(pH5.2),百奥莱博,BTN101202
我公司依托国内外技术研发人才的优势,公司的销*(代"售")额保持高速增长,企业规模不断扩大,拥有专业的技术研发团队,长期致力于ELISA试剂盒、生物试剂(包括)的研发,为客户提供引物设计与合成、免疫组化、PCR定量服务等一系列实验代测服务。
·SOB培养基
编号:BTN100813
英文名称:SuperOptimal Broth,Powder
规格:250g
SOB培养基是由美国科学家Hanahan在1983年在LB培养基的基础上开发的培养基,专门用于复苏电转化或化学转化的E.coli感受态细胞以提高转化效率。配制一升液体培养基需要25g本产品。
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
·DNase I溶液
编号:BTN130984
英文名称:DNase I Solution
规格:1.5mL
本产品是DNase I的10mg/mL的溶液,酶活性为1500-2500U/mg。DNase I从牛胰腺纯化得到是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶,分子量约32kDa(单体)。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5´端为磷酸基团,3´端为羟基。其活性依赖于*离子,并能被*离子或二价锰离子激活。*离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
产品特点:
1.即开即用,不需要用户单独配置。
2.可用于制备RNase-free的DNase。本产品为粗制品,可能含残留的RNase,不能直接用于清除RNA样品中的DNA。
3.本产品可直接用于DNase I Footprinting实验、缺口平移(Nick Translation)、制备DNA随机片断文库、制备TUNEL检测中的阳性对照。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
本产品可用于DNase I Footprinting实验、缺口平移(Nick Translation)、制备DNA随机片断文库、TUNEL检测中剪切基因组DNA作为阳性对照。具体使用方法请参考相关资料。
注意:本产品浓度较高,如需对其进行稀释,需要自备DNase I储存液。
DNase I储存液的配方:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl₂,50%(v/v)甘油。
附录:
1.DNase I活性定义:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
2.DNase I活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),10mM MgSO4,1mM CaCl2,1μg of pBR322 DNA。
3.纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶。
4.DNase I酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)甘油。
5.DNase I酶反应液(10×):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),25mM MgCl2,1mM CaCl2。
6.失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚*仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子、0.1%的SDS、DTT、巯基乙醇等还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。
北京3M乙酸*溶液(pH5.2)品牌关键词:3M乙酸*溶液(pH5.2),百奥莱博,BTN101202
3M乙酸*溶液(pH5.2)特价促销,价格合理,售后服务完善,确属质量问题可包换包退,免除您的后顾之忧。工作时间内可免费技术咨询和指导,我们将竭尽我们的全力为您服务,争取包您100%满意,欢迎新老客户来电订购!
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3M乙酸*溶液(pH5.2)为高校实验室,各大科研单位专用试剂,不得用于生产或者其它用途,本公司提供各种品牌的进口的试剂来满足不同客户的需求,欢迎前来订购!
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