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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存:
990
- 英文名:
Bradford Protein Assay Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Bradford法蛋白定量试剂盒折扣价,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货Bradford法蛋白定量试剂盒折扣价
产地:国产|进口
编号:BTN80814
英文名:Bradford Protein Assay Kit
Bradford法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一,在酸性条件下,考马斯亮蓝染料能与蛋白质结合形成复合物,其最大吸光值也由465nm转移到595nm,通过颜色的强弱测定蛋白质浓度的高低。本产品是基于Bradford法蛋白检测原理开发的产品。
产品特点:
1.快速,10-20个样品只需要10分钟即可完成测定。
2.稳定,加样混匀后2分钟既可测定,1小时内吸光度变化不超过10%。
3.线性范围在 50~1000μg/mL。
4.最小测量体积为1-20μL,最低测量蛋白量为0.5μg。
5.即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
6.有常规和微量两种检测模式。
7.不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。
8.但受略高浓度的表面活性剂影响,各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 100ml |
| BSA标准(2mg/mL) | 1ml |
| 滤纸 | 20张 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,BSA 标准-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、常规检测流程:
此方法在蛋白浓度30-1000μg/mL范围内呈现R2 = 0.996的直线线性回归,可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.制备 1×工作液。溶液A与无菌水按1:4 比例充分混合即为1×工作液(例:4mL溶液A+ 16mL 无菌水 = 20mL 1×工作液)。
2.滤纸过滤。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用1-2 星期。
3.检测:蛋白样品与1×工作液按1:50 比例混合(例:100μl蛋白样品 + 5mL 1×工作液,适用于3mL的比色杯;40μl蛋白样品 + 2mL 1×工作液,适用于1mL的比色杯;20μl蛋白样品 + 1mL 1×工作液,适用于平底透明96孔板)。
4.加样后,充分混匀。
5.室温放置5分钟。
6.检测吸光度。波长设定 = 595nm。
注意事项:
1.不同型号、规格的滤纸,具有不同的孔径,导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸,否则会导致不同的测定结果。
2.检测样品之前,应首先制备蛋白标准曲线。一般可使用BSA。
a)常规检测:建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、750μg/mL、1000μg/mL
b)微量检测:建议使用下述浓度的BSA。
0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。
3.检测细胞提取物或纯化蛋白样品,应使用相应的缓冲液制备蛋白标准曲线。
4.用 96孔板测定时,应确保没有气泡,否则会绝对增加吸光度的读数。
5.此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的表面活性剂影响。若SDS高于0.1%,TritonX-100高于0.1%,Tween20,60,80高于0.06%,可取少量样品加水稀释到适当浓度,再行测定。
二、微量检测流程:
此方法在蛋白浓度1~20μg/mL范围内呈现R2=0.992的直线线性回归,可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。
1.蛋白样品与溶液A按4:1比例混合,例:
| 蛋白样品 | 溶液A | 适用性 |
| 400μL | 100μL | 平底透明96孔板 |
| 2mL | 0.5mL | 1mL的比色杯 |
| 4mL | 1mL | 3mL的比色杯 |
2.加样后,充分混匀。
3.室温放置5分钟。
4.检测吸光度。波长设定= 595nm。
注意事项:
1.Bradford蛋白浓度测定的显色反应受许多去污剂的影响。应避免使用SDS,Triton X-100,Tween等溶解蛋白样品。对于难溶解的蛋白样品,可用1MNaOH 溶解和稀释。
2.Bradford蛋白浓度测定的显色反应依赖于蛋白中精*酸残基的数目,因此不同蛋白间测定的差异可能较大。
3.标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
4.由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。
5.不像其它一些蛋白浓度测定方法(包括Lowry法),Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二流苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.125%,Triton X-100低于0.125%,Tween 20低于0.06%,可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
北京现货Bradford法蛋白定量试剂盒折扣价极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·DNA洗脱液2.0
编号:BTN111205
规格:10mL
·冷冻型血液RNA保存液
编号:BTN130969
英文名称:Blood RNA freezing preservation solution
规格:100mL
·大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞
编号:BTN130558
英文名称:E.coli Rosetta(DE3)plysS Rosetta Competent Cell
规格:0.1mL*10
Rosetta(DE3)pLysS是Rosetta(DE3)的衍生菌株,为高度严紧表达宿主菌,一般用于毒性含真核蛋白靶蛋白表达,lac透性酶突变,可以控制表达水平,提供稀有密码子tRNAs。抗性为*霉素(34μg/ml)。
基因型:F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1(DE3)plysS pRARE(CmR)。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
·凋亡DNA提取试剂盒
编号:BTN130812
英文名称:Apoptotic DNA extraction kit
规格:24次
细胞凋亡是生命个体中的调控基因为了维持个体生命,调控细胞进行新陈代谢,促使不需要的细胞或者具有危险性的细胞自我凋亡(自杀)的现象,与细胞的发生、分化、生理现象(特别在免疫方面)有着密切关系。细胞凋亡时,染色体DNA以核小体为单位(185bp)进行DNA片断化产生DNA Ladder,这些被片断化了的DNA片段,可以使用电泳的方法进行检出。本试剂盒能够从培养细胞中选择性地提取片断化DNA,能够最大限度地抑制起妨碍作用的完整的染色体DNA的混入,并可以通过电泳法进行高效检出。
产品特点:
1.操作简便:使用Ready-to-Use型试剂。
2.高灵敏度:能够高灵敏度地检出凋亡细胞的片断化DNA。
3.高特异性:抑制完整的染色体DNA的混入,选择性地提取片段化DNA。
4.快速操作:整体操作约需2.5小时。
5.定量性:与荧光色素组合可以对片断化DNA进行定量。
6.安全性:不使用*酚*仿等。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 120ml |
| 溶液B | 1ml |
| 溶液C | 120μl |
| RNase A溶液(2mg/mL) | 60μl |
| Proteinase K溶液(10mg/mL) | 30μl |
| 微量核酸沉淀剂 | 3ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.冰上操作,将细胞样品(106-107)重悬于0.5mL Hanks平衡盐溶液(自备)或其他常用细胞缓冲液中。
2.将细胞重悬液与5mL溶液A混合,轻柔颠倒混匀后冰上放置4小时。如果暂时不用,可在-20℃最长保存四周。
3.800g离心5分钟,彻底移弃上清。
4.在细胞沉淀中加入40μL溶液B重悬细胞沉淀,室温放置至少30分钟,期间摇动数次。为方便离心,可将细胞重悬液转移至新的0.5mL或1.5mL Eppendorf离心管中,
5.800g离心5分钟,将上清移入到新的Eppendorf管中,并在SpeedVac上真空离心浓缩15分钟。
6.向浓缩物中加入5μL溶液C和2.5μl RNase A溶液(2mg/mL),混匀后37℃保温30分钟。
7.再加入1μl Proteinase K溶液(10mg/mL)溶液,37℃保温30分钟。
8.加5μl电泳上样缓冲液(自备),常规0.8%琼脂糖电泳分离、EB染色并观察电泳条带。
9.如果所得凋亡DNA溶液需要纯化(溶液中有proteinase K等),需要继续纯化,则加入50μL酚*仿混合液(自备),震荡3分钟混匀,13000g离心3分钟后转移上清到新离心管中,再加入2倍体积(约100μL)微量核酸沉淀剂,混匀后13000g离心15分钟,弃上清,再用1mL 75%的乙醇洗涤一次,空气放干后加入适当体积的水或TE溶解沉淀,所得溶解即凋亡片段DNA溶液。
使用效果:
使用本产品提取细胞DNA效果图。M为DNA Marker,最大条带1.3Kb。
1为正常非凋亡细胞DNA。2为凋亡细胞DNA。
北京现货Bradford法蛋白定量试剂盒折扣价关键词:BTN80814,Bradford Protein Assay Kit,Bradford法蛋白定量试剂盒
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北京现货Bradford法蛋白定量试剂盒折扣价关键词:BTN80814,Bradford Protein Assay Kit,Bradford法蛋白定量试剂盒
·一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD)
编号:BTN100908A
英文名称:One-Stop Stable SDS-PAGE Pack(A)
规格:30次
本产品是在SDS-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)套装基础上改良而得,主要改良的地方有两处:一是配胶液的pH偏酸,二是将还原剂加入到电泳液中。
产品特点:
1.偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE 更加稳定,便于配预制胶,增加实验的可重复性。
2.能降低蛋白质的脱*反应和烷基化反应,也能阻止蛋白质的二硫键再生成。
3.把还原剂整合到电泳液中,避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键,蛋白条带比常规SDS-PAGE 更加锐利。
4.可把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个,成分更简单。
5.更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合20 kD以上蛋白,B型适合2-50 kD蛋白),分离多肽时不需要Tricine-SDS-PAGE。
6.即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。
7.安全,免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
8.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
产品组成:
| 成分 | 30T(A) | 30T(B) |
| 丙*(代"烯")酰胺(干粉) | 60g | 60g |
| 甲叉双丙*(代"烯")酰胺(干粉) | 3g | 3g |
| 长效期SDS-PAGE 配胶液,4× | 200ml | 200ml |
| 长效期SDS-PAGE还原剂 | 10ml | 10ml |
| TEMED | 1.5ml | 1.5ml |
| 过硫*(代"酸")铵 | 1g | 1g |
| 长效SDS-PAGE上样液,5× | 1ml | 1ml |
| 长效期SDS-PAGE电泳液A型 | 20L | - |
| 长效期SDS-PAGE电泳液B型 | - | 20L |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存(SDS-PAGE上样液需-20℃保存),有效期一年。
使用方法:
一、使用本产品不需要浓缩胶,直接配制分离胶。如果使用A型电泳液(分离30 KD以上蛋白质用),最好配制10%的PAGE胶;如果使用B型电泳液(分离2-30 KD的蛋白质用),最好配制12%的PAGE胶。也可以选择其他胶浓度,但各成分用量需要按比例调整。
1.第一次使用本产品时需先配制30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水,充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2.第一次使用本产品时还需配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(简称30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对长效期SDS-PAGE电泳,丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1,因为此时PAGE胶的孔径最小,分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中,摇晃溶解即得30%的AB溶液,该溶液最好4℃避光(可包上锡箔纸壁光)保存并在一个月内用完。30% AB溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
3.新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵):按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP 管中,摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
4.本产品不需要配制分离胶和浓缩胶两种胶,只需要配一种连续胶。配制方法如下(以下是以配制10mL的胶的用量为例,用户自己需要根据胶的大小决定所需体积):
| 胶浓度 | 用量(mL) | 总体积 (mL) |
||
| 去离子水 | 30% AB溶液 | 4×长效期SDS-PAGE配胶液 | ||
| 10%(对A型) | 4.20 | 3.30 | 2.50 | 10 |
| 12%(对B型) | 3.50 | 4.00 | 2.50 | 10 |
5.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6.加入50μL新配制的10%APS和30μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则按比例增加),迅速摇匀后倒胶。
7.在胶的液面达到顶部的时候停止灌胶并插入梳子,室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
8.拔出梳子,用水冲洗加样孔。
9.配制的PAGE胶可以在4℃长期放置数月,直到使用。注意:需要盖上1×长效期SDS-PAGE 配胶液,否则PAGE胶会变干而无法使用。
10.使用时,将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽加入足够量的1×长效期SDS-PAGE电泳液(A型或B型)。
注意:长效期SDS-PAGE电泳液A型或B型均以干粉形式提供,足够配20 L 1×电泳液。配制时需将全部干粉(含多种没有充分混合的成分,必须一次性全部使用)溶解在去离子水中,并定容到1 L,得到20×长效期SDS-PAGE电泳液,使用时再用去离子水稀释成1×电泳液。20×长效期SDS-PAGE电泳液不需要调pH,可以室温放置。
11.在上槽中加入适量的1×长效期SDS-PAGE电泳液和1/200 体积(以电泳液体积为基数)的长效期SDS-PAGE还原剂并用玻璃棒搅拌混合均匀。
12.在蛋白质样品中加入5×长效期SDS-PAGE上样液(8μL样品加2μL上样液),72℃加热10分钟。注意:上样液中的一些成分在低温保存时会沉淀,所以用前需要65℃保温10分钟左右使沉淀溶解,混匀后才能使用。上样液中的2-巯基乙*(代"醇")容易挥发,使用多次后用户可以在10μl样品(蛋白质样品+上样液的混合液)中补加0.5μl自备的2-巯基乙*(代"醇")原液,以便使蛋白质充分变性。如果样品是蛋白质沉淀(如TCA沉淀得到的蛋白质),则需要用Tris缓冲液将其pH调到中性(可用pH试纸检测),否则残留溶剂可能会改变上样液的pH,严重影响电泳效果。
13.短暂离心,取上清液上样。上样的蛋白总量跟检测方法相关,如果用银染,可以只上样ng级别(对每条带的蛋白量而言),如果用考染,需要上样μg级别(对每条带的蛋白量而言)。
14.用150V恒压电压进行电泳,直到染料进入胶底部(在B型电泳液中,*酚蓝的速度相当于3-5 KD的蛋白质)。注意:在长效期SDS-PAGE中的电泳速度要快于普通SDS-PAGE。在B型电泳液中的速度又快于A型电泳液。过程中,电流会降低,属于正常现象。
15.终止电泳,取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或转膜)。注意:Western转膜需要专门的转膜液(百奥莱博可以提供)。
二、如果需要更高分辨率,也可把上法配制的胶当成分离胶,并在其上再叠加4%的浓缩胶,操作如下:
16.按上面方法配制分离胶,只是倒胶后在胶面距离顶部1.5cm的时候,或者距梳子齿0.5cm时,停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm 厚的水,使胶顶部液面平整。室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)后,用1×长效期SDS-PAGE 配胶液洗涤凝固的胶的顶部,待用。
17.配制4%浓缩胶(参考上节第4-6 步)。倒胶后在液面达到顶部时停止灌胶,插入梳子,室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
18.拔出梳子,用1×电泳液(A型或B型)冲洗加样孔,后续处理接第7步。
北京百莱博科技有限公司是蛋白质研究产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购北京现货Bradford法蛋白定量试剂盒折扣价。
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文献和实验发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1.准备工作: A、 裂解液溶解后混匀,冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备:每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT,冰浴备用。 2.样本处理: A、悬浮细胞 1) 诱导完成后的细胞,2000 rpm离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS轻轻重悬细胞并计数
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功,或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存,需对细胞裂解液进行蛋白定量;为了判定蛋白的产量,需对纯化好的蛋白进行定量;为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记,同样需首先对蛋白样品进行定量,以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒,如BCA定量试剂盒等,操作起来,简便快捷。当然也有不少实验室,还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
目前常用比色法测定样品蛋白的含量:Bradford法(考马斯亮蓝法)、Lowry法(Folin-酚试剂法)、 BCA法等。但各有优缺点,大家可以根据具体情况选取。按相应蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。收集完蛋白样品后,为确保每个蛋白样品的上样量一致,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大,大家可以根据具体情况选取。Bradford法(考马斯亮蓝法):考马斯亮蓝G
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