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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
967
- 英文名:
Affinity Chromatography Colum(6mL)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京6mL亲和层析柱促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京6mL亲和层析柱促销
品牌:百奥莱博
编号:BTN110809
产地:国产|进口
英文名:Affinity Chromatography Colum(6mL)
本产品适用范围广泛,可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子;还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。
亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原-抗体、酶-底物或抑制剂、激素-受体等),通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分离纯化。
亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法,其示意图如下:

储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
常用亲和标签及纯化方案:

北京6mL亲和层析柱促销极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·PCR法DNA探针生物素标记试剂盒
编号:BTN90604B
英文名称:PCR DNA Labeling Kit(Biotin)
规格:5次
PCR标记的原理是用带标记的dNTP进行PCR,最后得到的PCR产物将带有标记,可以直接用于杂交试验。其原理示意图如下:

产品特点:
1.一站式,本试剂盒提供经过优化的试剂,不需要用户自己摸索。
2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。
3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针,足够多次杂交实验用。
4. 既可用于制备双链探针,也可以用于单链探针。
5. 90604A需自备含标记核苷酸的dNTP,90604B和90604C分别含生物素和地高*(代"辛")标记的底物。自备的标记包括fluorescein-dUTP、hydroxycoumarin-dUTP、resorufin-dUTP和aminoallyl-dUTP等。
6. 本产品得到的探针参入率一般为4-5%(每100个核苷酸中有4-5个将带有非同位素标记),有效降低了空间阻碍,检测效果最佳。
7.可以用于Southern和Northern Blot、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等分析。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×标记专用PCR Mix | 500μl |
| dNTP,2mM each | 50μl |
| 含Biotin-11-dUTP的dNTP | 25μL(仅B有) |
| 含DIG-11-dUTP的dNTP | 25μL(仅C有) |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
注:标记专用PCR Mix不含dNTP。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:准备工作
1. 按常规的方法设计PCR引物,使探针长度在400-800bp之间。过短则标记参入少,探针杂交信号强度减弱;过长则非特异杂交增加,背景变强。
2. 根据PCR引物优化PCR条件。
3. 由于标记的dNTP比较珍贵,所以本试剂盒不推荐以基因组DNA或其他复杂DNA为模板直接进行PCR标记,而是建议采取下述的两步法标记来提高成功率,即先制备非标记PCR产物,再以之为模板制备标记的PCR产物。
二:非标记PCR产物的制备
4. 设置50μL PCR的反应体系:
| 成份 | 用量 |
| 2×标记专用PCR Mix | 25μl |
| dNTP,2mM each | 5μl |
| 自备的探针引物一(10pmol/μL) | 1μL(10μM) |
| 自备的探针引物二(10pmol/μL) | 1μL(10μM) |
| 自备的模板DNA | 1μg基因组DNA或1ng质粒DNA |
| 超纯水 | 补到50μL |
5. 按已经优化的PCR参数进行PCR。
6.电泳检测和胶回收所需的PCR产物,并定量。用10 pmol引物一般能得到1μg左右的PCR产物(具体取决于PCR产物的长度)。注意:最好采取胶回收而不是PCR回收以避免残留引物干扰后续的标记PCR。
三:标记PCR反应(最好做一个不加标记的对照用于定量)
说明:在设置下面反应时,如果加一种引物,就得到单链标记的PCR产物;如果加两种引物,则得到双链标记的PCR产物。由于双链PCR探针在杂交前虽然要变性成单链后使用,但杂交时变性的双链彼此还会复性,这种复性会与探针-靶DNA杂交反应相竞争,降低杂交效率,因此强烈推荐使用单链标记的DNA探针。
| 成份 | 样品 | 对照 |
| 2×标记专用PCR Mix | 25μl | 25μl |
| 含Biotin-11-dUTP的dNTP或 含DIG-11-dUTP的dNTP或 自备的含其他标记dUTP的dNTP |
5μl | 不加 |
| dNTP,2mM | 不加 | 5μl |
| 双链标记:探针引物一和引物二 单链标记:探针引物一或引物二 |
每种50 pmol 一种50 pmol |
每种50 pmol 一种50 pmol |
| 上步胶纯化所得PCR产物 (单链标记可用100ng) |
10 ng | 10 ng |
| 超纯水 | 补到50μL | 补到50μL |
注意:本试剂盒提供的dNTP混合物中,标记底物与非标记底物的比例已经进过优化,如果自备标记dUTP,其与dTTP的最佳比例需要优化,标记不同,比例不同。对DIG-11-dUTP,最佳比例1:3;对BrdUTP,最佳比例为1:1。
7. 按第5步的PCR参数进行标记PCR,但需要进行下列修改:一是循环数增加到35-55个循环。由于模板为纯化后的PCR产物,探针对扩增长度完整性要求不高(长度不均的探针由于能形成网络结构,效果反而更好),所以可以增加循环数;二是延伸时间增加15秒,因为标记dUTP参入到DNA的速度比常规的dTTP慢;三是降低复性温度5-7℃,因为标记核苷酸参入到DNA后,新模板的Tm值将降低。
8. 标记探针的定量:取标记反应和对照反应的产物1-5μl,在琼脂糖凝胶上跟浓度已知的DNA marker一起电泳,并判断探针的浓度。由于标记反应的PCR产物中额外带有非同位素的配体(生物素,地高*(代"辛")等)、因此其泳动速度将慢于非标记PCR产物(但同位素标记不能用此法)。
注意:如果扩增的是单链DNA探针,其结合EB的能力远低于双链DNA(EB是嵌合到双链碱基对之间的,而单链DNA没有碱基对,只有一些局部区域折叠形成的有限双链区,因此能结合的EB很少),因此EB染色的强弱不能准确反应DNA的浓度,可以采用银染定量(跟marker比较)。一般100ng模板按上述条件经过单链PCR扩增可得到700ng左右探针。
9. 剩余的PCR标记产物可以不经过纯化,直接加入(对单链PCR探针)杂或加热变性并急冷后加入(对双链PCR探针)到杂交液中使用。如果暂时不用请放-20℃长期保存。如果需要纯化,请使用乙酸铵/乙醇沉淀法。
北京6mL亲和层析柱促销关键词:6mL亲和层析柱,Affinity Chromatography Colum(6mL),BTN110809
·非冻型尿液DNA保存液
编号:BTN90315
英文名称:DNAhold Urine RNA non-freezing preservation
规格:100mL
本品在室温条件下长期保存用于DNA提取的尿液样品保存液。它能够高效、长期保证DNA分子的完整性。
产品特点:
1. 保存时间长,可室温保存尿液DNA长达六个月,尤其适合于野外尿液样品采集。
2. DNA完整性好,纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA无化学修饰,提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4. 能防止尿液在4℃结晶。
5. 安全可靠,本产品无毒无害。
6. 使用简单,直接把新鲜的尿液样品与本产品混合即可。
储存条件:室温运输及保存,有效期两年。
使用方法:(以DNA提取为例)
1. 迅速将尿液与本产品按10:1的比例混合。
2. 常温闭光保存直到使用。
3. 使用常规液体DNA提取方法提取DNA即可。推荐使用柱式尿液DNA提取试剂盒(BTN90314),使用柱式尿液DNA提取试剂盒提取本产品保存的尿样,兼容性好,提取效率更高。
4. 提取得到DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
北京6mL亲和层析柱促销关键词:6mL亲和层析柱,Affinity Chromatography Colum(6mL),BTN110809
PY02-163 XLD琼脂 250克
茶碱 L-(+)-2-Chlorophenylglycine 58-55-9
2′-脱氧鸟苷-5′-单磷酸二*盐 DMTMM 33430-61-4
ARB12647 大鼠窖蛋白CAveolIn1(CAv-1)ELISA检测服务 Rat caveolin-1,cav-1 ELISA KIT
ARB11506 人脂蛋白脂酶(LPL)定量分析 Human lipoprotein lipase,lpl ELISA KIT
BTN80911 蛋白酶K溶液 Proteinase K Solution
细菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法) 50T|100 T
ARB11834 人醛固酮(ALD)酶联免疫定量检测 Human aldosterone,ald ELISA KIT
ARB13513 鱼类甲状腺素(T4)免费代测 Fish thyroxine,t4 ELISA KIT
F030837 BIOTIN标记山羊抗人IgG FC抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*BIOTIN
ARB12322 大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪*酸激酶2(TIe-2)elisa测定使用说明书 Rat tyrosine kinase with immunoglobulin-like and egf-like domains 2,tie-2 ELISA KIT
ARB11021 人尿游离皮质醇(UFC)ELISA检测服务 Human urinary free cortisol,ufc ELISA KIT
BL1066 MH(B)培养基
5-肌苷三磷酸三*盐 DSC 35908-31-7
F030433 胶体金标记山羊抗人IgG(H+L)抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*GOLD
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PY08-078 绿浓菌素测定用培养基平板 9CM 10皿/盒,用于绿脓杆菌绿浓菌素的测定试验。
ARB13337 牛免疫球蛋白G(IgG)elisa检测操作说明书
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购北京6mL亲和层析柱促销。
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文献和实验你是否苦于你纯化的标签蛋白无法达到理想纯度而日夜发愁?是否在换了新的标签后仍不太满意而承受老板们鬼畜般的霹雳大吼?朋友别哭,相信这篇文章可以为你带来纯化高纯度蛋白的新思路。 进行蛋白质功能研究的关键在于得到高纯度蛋白。习惯于构建单标签的你想必遇到过杂质太多,蛋白表达量少甚至不稳定的情况。何不根据目的蛋白性质构建双标签蛋白进行两种不同亲和层析柱的纯化?没准会有意想不到的效果。 01双标签蛋白助力于目的蛋白的高特异性 单组氨酸标签蛋白的亲和层析结果通常不能保证杂蛋白的有效去除
,反之应选阳离子交换剂。一般情况下,DEAE-纤维素用于分离酸性蛋白,而CM纤维素用于分离碱性蛋白质。 下面以DEAE-纤维素操作为例,介绍试验方法 2.膨胀活化 此步的目的在于除去杂质,暴露DEAE-纤维素上的极性基团。DEAE-纤维素的用量则根据柱容积的大小和所需过柱样品的量来决定。一般是1.0g DEAE-纤维素相当于6ml~8ml柱床体积。 表1-4 分离的血清与所需DEAE—纤维素量及其他条件的大致关系 血清样品量(ml) DEAE需用量(g) 选层析柱规格(cm) 选脱液量
DNA聚合酶,限制性内切酶mluI,nheI,sphI,notI均购自GIBCOBRL公司,抗CD3单克隆抗体HIT3a由本所协和科技公司提供,抗Pgp单克隆抗体PHMA02由本室制备。鼠抗E-tag抗体,HRP标记的鼠抗E-tag抗体及抗E-tag亲和层析柱均购自Pharmacia公司。FITC标记的羊抗鼠IgG多抗购自北京中山生物工程公司。其它均为国产分析纯生化试剂。(3)PCR引物P1 5’ CTA GCG CAC GCG TAC GCT GAC ATC GAG CTC ACT CAG TCT
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