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- 详见说明
- 中国
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- 2025年08月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
17
- 供应商：
圻明
- 检测范围：
详见说明
- 检测方法：
免疫组织化学
- 应用：
病理学研究
- 适应物种：
人大小鼠兔牛
- 标记物：
HRP-SA
- 样本：
组织
- 规格：
50T-100T
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中，免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50-75%。
组织的固定：病理学研究和免疫组化实验中，组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中，使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用，防止细胞自溶等，从而保持组织和细胞内的抗原性，使抗原不失活。
人S100钙结合蛋白(S100)免疫组化试剂盒组织固定步骤
1.从动物体内取出相应组织，放入4%多聚甲醛，此时4%多聚甲醛混有血等杂质，将该组织放入一杯新鲜的4%多聚甲醛中，如此再三，操作三次后，用保鲜膜封闭固定皿后室温孵育5分钟，将其放于4℃冰箱，过夜孵育。
2.次日，去掉4%多聚甲醛，将该组织放入新鲜的0.1MPBS中孵育30分钟后，将该组织放入新鲜的0.1MPBS中孵育30分钟。
3.弃掉PBS，将该组织放入70%的乙醇中，孵育1小时。
4.弃掉70%乙醇，将该组织放入80%的乙醇中，孵育1小时。
5.弃掉80%乙醇，将该组织放入90%的乙醇中，孵育1小时。
6.弃掉90%乙醇，将该组织放入95%的乙醇中，孵育1小时。
7.弃掉95%乙醇，将该组织放入100%的乙醇中，孵育1小时。
8.弃掉100%乙醇，将该组织放入100%的乙醇中，孵育1小时。
9.弃掉100%乙醇，将该组织放入100%的乙醇中，孵育1小时。
10.弃掉100%乙醇，将该组织放入二甲苯中，透明30分钟。
11.弃掉二甲苯，将该组织再次放入新鲜二甲苯中，透明30分钟。
12.弃掉二甲苯，将该组织放入热熔的石蜡中，包埋该组织。
13.待热熔的石蜡凝固，即可取出包埋块，备用或者切片。
注意事项：
1.固定组织时，必须有足够的固定液，一般为组织体积的10-15倍。
2.固定组织要新鲜，组织取材后立即固定。
3.组织块的体积应该小而薄，一般免疫组化组织大小为1.0㎝×1.0㎝×1.0㎝×0.2㎝。
4.固定效果随温度升高而加强，一般在-70℃~30℃之间。
5.10%中性甲醛和4%多聚甲醛适合于固定，37℃或者常温固定，适合于许多蛋白质、抗原，能保持其与抗体的反应能力。
6.组织越大，固定时间越长。固定时间与温度成反比，以实际情况为准。
人S100钙结合蛋白(S100)免疫组化试剂盒石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第 5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育
30 min；
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），
37℃湿盒中孵育 30 min；
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
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