沙门志贺双通道荧光PCR试剂盒

荧光定量PCR技术及其应用

荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术

细菌学诊断新技术(二)

的沙门氏菌。由于该方法最小检出量只有1个细菌/25克样品，所以需要增菌培养。AOAC最近认可了Gene-Tark沙门氏菌比色分析法。这种探针标记物为异硫氰酸荧光素（FITC），再用辣根过氧化酶标记抗FITC的抗体结合放大探针，在多聚腺苷酸尾部和多聚胸腺嘧啶侵染棒固相薄膜上杂交，对239株沙门氏菌的特异性检出率为100%,假阳性率为0.8%（BAM/AOAC培养法假阳性率是2.2%.）2.2 李斯特杆菌1981年首次确定它是一种食源性病原菌，1985年加尼福利亚发生爆发性流行，现用检测方法大多采用冷

实时定量PCR的原理、探测化学物质及探针优化(二)

SYBRR Green PCR试剂盒得出相当好的结果。重复试验的结果非常接近，NTC根本没有出现扩增。这个试剂盒对于利用SG扩增低拷贝数的模板非常有用。3.2 双标记探针 双标记探针的优化比SG优化容易。最重要的事情，也就是需要优化的是引物/探针浓度和它们的比例。最适的MgCl2浓度通常是4-5mM （终浓度），然而商业上可买到的Master Mixes用到7.5mM （终浓度）。 荧光探针的设计直接关系到实时监测的成败。下面的规则总结了设计引物和双标记探针应该考虑的一些建议。 a） 针对双