诺如病毒G1G2双通道荧光PCR试剂盒

实时定量PCR的原理、探测化学物质及探针优化(二)

SYBRR Green PCR试剂盒得出相当好的结果。重复试验的结果非常接近，NTC根本没有出现扩增。这个试剂盒对于利用SG扩增低拷贝数的模板非常有用。3.2 双标记探针 双标记探针的优化比SG优化容易。最重要的事情，也就是需要优化的是引物/探针浓度和它们的比例。最适的MgCl2浓度通常是4-5mM （终浓度），然而商业上可买到的Master Mixes用到7.5mM （终浓度）。 荧光探针的设计直接关系到实时监测的成败。下面的规则总结了设计引物和双标记探针应该考虑的一些建议。 a） 针对双

幽门螺杆菌小鼠模型的建立及检测

】 1. 器材　荧光定量PCR仪，微需氧袋。 2. 试剂　幽门螺杆菌菌株NCTC 11637，布氏肉汤培养基（Brucella Broth），2％尿素水溶液，酚红磷酸缓冲液。幽门螺杆菌荧光定量PCR试剂盒。 醋酸缓冲液(pH3.6)： 无水醋酸钠          1.64 g 醋酸                2.5 ml 蒸馏水              200 ml 1%硝酸银溶液： 硝酸银             

【分享】荧光定量PCR详细流程和问题解析

是否单峰　　建议使用HPLC纯化的引物3. MgCl2浓度　　降低MgCl2浓度以减少非特异性产物　　最低可至1.5nM　　同时做梯度实验和NTC对照4. 反应温度和时间参数　　反应温度参考所用酶的种类　　退火温度使用温度梯度功能优化　　反应时间与常规PCR类似，扩增片断一般为200－300bp5. TaqMan探针　　引物、探针设计：　　首先选择探针序列　　探针的Tm值为68－70度，长度不应超过30碱基　　探针的5’端不应是G，G有可能会淬灭荧光素　　引物应尽量靠近探针，扩增片断不超过400