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见说明书
- 供应商:
上海沪震实业有限公司
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-20℃保存
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2ug
pEGFP-N3 哺乳动物细胞表达载体
储存条件 : -20℃单位 : 支
规格:1ug质粒(10ul,100ng/ul),500ul甘油菌
储存温度:-20℃
载体说明:
载体类型:荧光表达载体
载体大小:4729bp
载体抗性:Kanamycin(卡那霉素)
载体标签:C-EGFP
筛选标记:Neomycin (新霉素)
复制子:ori
启动子:CMV
克隆菌株:哺乳细胞
培养条件:LB,37℃有氧
pegfp-N3 哺乳动物细胞表达载体
操作方法:
本产品包含一份质粒和一份含该质粒的克隆菌种,收到产品后请取1ul质粒转化进合适的宿主。不建议优先使用甘油菌。如需使用菌种,请于抗性琼脂平板上四区划线,挑单菌落培养。
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文献和实验先前已经提到 Strep-tag® 的历史,现在我们将着重介绍 Strep-tag® 在哺乳类细胞表达系统的应用。虽然大肠杆菌 E.coli 表达系统经济实惠,但由于缺乏重要的脂类,分子螫合物,以及重要的翻译后修饰,用它表达真核蛋白,可能会影响蛋白本身的折叠及功能,以膜蛋白为例,大肠杆菌表达系统能影响目标蛋白在细胞膜的插入位置、及其应有的功能[1]。除此之外,当目标蛋白大于 50kDa 时,使用大肠杆菌系统可能表达出不完整的蛋白[2]。所以,为了研究特定蛋白的功能(如:信号通路)、生产较大
按照宿主细胞的类型,可将基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。与其它系统相比,哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠,提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能,因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。从最开始以裸露DNA直接转染哺乳动物细胞至今的30余年间,哺乳动物细胞表达系统不仅已成为多种基因工程药物的生产平台,在新基因的发现、蛋白质的结构和功能研究中
克隆,即表达目的基因的克隆,有报道说这种双顺反子的共表达率为90%。这就大大提高了筛选率,简化了实验过程。 将强启动子、增强子和可扩增的筛选标志组装在同一载体上,构建高效表达和筛选的表达载体并将其运用于最合适的表达系统中,是当今真核表达载体构建研究发展方向。 真核细胞表达系统主要包括酵母表达系统、昆虫细胞表达系统和哺乳动物细胞表达系统。真核细胞常见表达载体为:pCMVp-NEO-BAN载体、pEGFP,增强型绦色荧光蛋白表达载体、pEGFT-Actin 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体
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