即用型丽春红染色液供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括即用型丽春红染色液供应在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：即用型丽春红染色液供应
规格：100ml
英文名：Ponceau S Staining Solution
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本染色液为即用型工作液，可以直接使用，不用稀释。丽春红染色液可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜(NC膜)和醋酸纤维素膜上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的*基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。注：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。丽春红对蛋白的检测下限是250ng。

使用方法：
1、电泳结束后，将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸泡到适量丽春红染色液中，摇动3-5分钟或更长时间，直至出现清晰条带。
2、用蒸馏水漂洗2-3次，每次3-5分钟，直到膜背景干净为止。
3、观察保存结果。

储存条件：室温，有效期12个月。

我公司的即用型丽春红染色液供应，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·λ噬菌体DNA
编号：RFT118
英文名称：Lambda bacteriophage DNA
规格：100μg
本品常用于限制性内切酶的底物。

长度：48502bp
纯度：A260/A280=1.8～2.0
浓度：0.4μg/μl
分子量：31.5×10^6Da
贮存溶液：10mM Tris-HCl pH8.0，1 mM EDTA
来源：Bacteriophage λcⅠ857 Sam7

储存条件：-20℃。

·SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
编号：RFT076
英文名称：SDS-PAGE gel preparation and electrophoresis Kit
规格：50次
本公司提供的SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。

试剂盒组成：

 

组份	规格	保存条件
40%PAA(29:1)	100 ml	4℃
4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8	100 ml	4℃
4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8	50 ml	4℃
APS(干粉)	0.5 g	RT
TEMED	0.5ml	4℃，避光
4×蛋白电泳上样缓冲液(含还原剂)	1 ml	-20℃
5×Tris-甘*酸电泳缓冲液(干粉)	1 L	RT

使用方法：
一、配制分离胶(各试剂使用量请参考表二)
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度(表一)，再按照下面的分离胶配方表(表二)配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。

表一：不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：

SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
6%	50-150kD
8%	30-90kD
10%	20-80kD
12%	12-60kD
15%	10-40kD

配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。

制备分离胶步骤：
1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2、按照表二将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合

表二：SDS-PAGE分离胶配方表

组份	不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
	5ml	10ml	15ml	20ml
8％胶
H2O	2.7	5.4	8.1	10.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1	2	3	4
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
10％胶
H2O	2.45	4.9	7.35	9.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.25	2.5	3.75	5
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
12％胶
H2O	2.2	4.4	6.6	8.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.5	3	4.5	6
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2
15％胶
H2O	1.825	3.65	5.475	7.3
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8	1.25	2.5	3.75	5
40％ PAA(29:1)	1.875	3.75	5.625	7.5
TEMED	0.005	0.01	0.015	0.02
10％ APS	0.05	0.1	0.15	0.2

二、浓缩胶制备：
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、按照表三将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5、静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

表三：SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表

组份	不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
	2 ml	4 ml	5 ml	10 ml
H2O	1.17	2.34	2.925	5.85
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8	0.63	1.26	1.575	3.15
40％ PAA(29:1)	0.2	0.4	0.5	1
TEMED	0.002	0.004	0.005	0.01
10％ APS	0.02	0.04	0.05	0.1

三、电泳：

凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘*酸电泳缓冲液的配制-1 L：将一包5×Tris-甘*酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘*酸电泳缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘*酸电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘*酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘*酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿*酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。


即用型丽春红染色液供应关键词：Ponceau S Staining Solution,RFT056,即用型丽春红染色液


·磷酸酶抑制剂混合物(100×)
编号：RFT192
英文名称：Phosphatase inhibitor cocktail
规格：1ml|5×1ml
本品是一种用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶抑制剂混合物(Imidazole，Sodium fluoride, Sodium tartrate dihydrate, Sodium molybdate，β-glycerophosphate and Sodium orthovanadate in H2O)，可广泛抑制蛋白提取物中的酸性、碱性、丝*酸/苏*酸和酪*酸磷酸酶。一个包装的本产品通常足够用于100ml的裂解液的配制。

细胞或组织等提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。本磷酸酶抑制剂混合物可以有效抑制常见磷酸酶对于蛋白的去磷酸化作用，保持蛋白原有的磷酸化状态。*化*是酸性磷酸酶可逆抑制剂；咪唑是碱性磷酸酶抑制剂；β-甘油磷酸是丝*酸/苏*酸磷酸酶可逆抑制剂；正钒酸*是碱性磷酸酶和酪*酸磷酸酶可逆抑制剂；酒石酸*是酸性磷酸酶抑制剂。

本产品为经优化和测试的用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物蛋白提取的磷酸酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝*酸/苏*酸、酪*酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例把磷酸酶抑制剂混合物加入裂解液中即可用于样品蛋白的提取，并有效抑制蛋白的去磷酸化。

使用方法：

1、使用前常温溶解磷酸酶抑制剂混合物 (100×)，混匀，按照1:100 比例加入到组织细胞裂解物中，如1 ml裂解物中加入10μl抑制剂混合物。磷酸酶含量特别丰富的组织，可以适当提高加入量，使其终浓度为2～3×。含有磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。根据需要，可以同时考虑添加适当的蛋白酶抑制剂混合物。
2、待所需的抑制剂添加完毕并混匀后，就可以开始进行样品的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


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·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号：RFT037
英文名称：Bacterial genomic DNA Extraction Kit
规格：50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌(革兰氏阳性菌和阴性菌)的基因组DNA。溶菌酶能有效去除细菌细胞壁；蛋白酶K能把核酸解离出来； RNaseA能去除痕量的RNA污染；离心吸附柱能够高效、专一吸附DNA，最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

试剂盒组成：

组份	50次	100次	贮存方式
缓冲液GA	15 ml	30 ml	室温
缓冲液GB	15 ml	30 ml	室温
去蛋白液GD(浓缩液)	18 ml	36ml	室温
漂洗液GW(浓缩液)	25 ml	25 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	15ml	室温
蛋白酶K(20mg/ml)	1 ml	2×1 ml	-20℃
溶菌酶(5mg/ml)	1ml	2×1 ml	-20℃
RNase A(10mg/ml)	1ml	1 ml	-20℃
吸附柱CG	50个	100个	室温
收集管(2 ml)	50个	100个	室温
说明书	1份	1份

准备工作：
1、准备55℃和70℃水浴；无水乙醇；1.5ml灭菌离心管。
2、按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液GW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3、每次使用前请检查缓冲液GA，缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取细菌培养液1–2 ml，10,000 g离心1分钟，尽量吸净上清；向细菌沉淀中加入180μl EB，旋涡混匀后加入18μl 溶菌酶，室温放置10-15分钟，期间间歇混匀几次。
注：溶菌酶的用量和处理时间与处理的细菌种类密切相关，用户可以根据细菌种类进行调节。如革兰氏阳性菌应将处理时间延长到30-60分钟。
2、10000g离心1分钟，吸弃大部分上清，留下约10μl液体，彻底混匀。
注：由于余留的液体较少，彻底混匀菌体不太容易，用手指弹动管壁附加枪头反复吹打既能完全混匀菌体。混匀一定要彻底，否则容易导致步骤8中离心柱堵塞。
3、向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA，混匀。
4、向管中加入20μl 蛋白酶K，混匀，55℃处理15-30分钟，期间间歇混匀2-3次至溶液清亮。
注：加入蛋白酶K后会产生絮状物，消化彻底的标志是絮状物完全消失，溶液变清亮。如消化不彻底，会导致步骤8中离心柱堵塞。
5、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液，混匀后室温放置2分钟。
6、加入220μl缓冲液GB，混匀，70℃放置10-30分钟(对于革兰氏阳性菌，时间应延长到60分钟)。
注：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置相应时间后溶液会变清亮。如溶液未变清亮，应延长70℃处理时间。如果絮状物不能处理干净，容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
7、加入220μl无水乙醇，充分混匀。
注：加入乙醇后会产生絮状沉淀，可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理，容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
8、将上一步所得溶液和絮状沉淀加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，11000g离心5分钟，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
注：如果出现吸附柱堵塞现象，可将离心时间延长到10分钟。
9、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11,000 g离心2分钟，倒掉废液，吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入700μl漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11,000 g离心60秒，倒掉废液，吸附柱放入收集管中。
11、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液GW，11,000 g离心60秒，倒掉废液。
12、吸附柱CG放回收集管中，11,000 g离心2分钟。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
13、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，11,000 g离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
14、DNA产物-20℃保存。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

储存条件：室温，有效期12个月。

我公司正在打折促销蛋白质研究全系列产品，恭候您的咨询选购即用型丽春红染色液供应。