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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
999
- 细胞类型:
原代细胞/细胞系
- 品系:
详询
- 组织来源:
新鲜组织
- 物种来源:
Mammals
- 免疫类型:
血液科
- 细胞形态:
上皮成肌原粒淋巴成纤维等
- 器官来源:
正常组织源性
- 运输方式:
90%完全培养基+711%DMSO,液氮储存
- 年限:
长久
- 生长状态:
悬浮贴壁
- 规格:
T25
(1)组织来源于正常新鲜组织。
(2)鉴定:Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
(3)原代细胞培养末期液氮冻存。
(4)每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。
(5)Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
圻明生物原代细胞引种于:ATCC,武大细胞库,上海生化细胞所,中国科学院典型培养物保藏委员会等。 我们为全国广大客户提供优质的产品,完善的技术支持,过硬的质量保证。
操作指南及质量保证:
1. 细胞为三代以内,活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好,我们免费重新发货。
2. 实验过程中若确定是客户问题,客户需支付物流和耗材费用,我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。
3. 产品使用过程中,华拓生物可提供技术上的指导。
HEK-293T,人体肾脏细胞系细胞培养:细胞请于细胞培养箱中培养,大部分细胞是37℃,5%CO2,湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致,请仔细阅读相应的细胞说明书,使用正确的培养基及培养条件;细胞于培养瓶或培养皿中培养,加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基(一般液面高度2-3㎜即可)。
HEK-293T,人体肾脏细胞系细胞传代:1.细胞培养至密度80%以上时即可传代,先将细胞培养基取出3ml用15ml离心管装好,其他培养基全部吸干舍弃;2.培养皿加入2-3ml无菌PBS,轻轻晃动,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍弃;3.加入1ml胰酶,轻轻晃动,使胰酶浸没到皿底所有部分,将皿盖好放入培养箱中消化;4.3分钟后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞不再贴壁,即可加入第一步收集的培养基混匀,若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至不贴壁为止;5.将细胞悬液均匀分成几份,分别加入不同培养皿中,补加新培养基后放回培养箱培养。
如不能在收到细胞后及时操作细胞,T25或者离心管发货的细胞可以消毒后在培养箱过夜,干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80°冰箱,若干冰完全升华,需立即复苏细胞。
T25瓶或者离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境,同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁,此步骤非常必要不可忽略。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞,可以收集上清后离心(1200rpm,5min),将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中,由于不断震荡及环境不适,可能导致细胞破碎死亡,从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下,平衡后,贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基或者传代至新瓶中培养即可;悬浮细胞可以离心(1000rpm,3min)收集细胞,用PBS重悬后再离心一次,再用新的培养基重悬并接种细胞。
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文献和实验你的基因是什么物种?转的什么细胞? 基因是人类基因,细胞也是人类细胞,由生殖系统肿瘤衍生的细胞系…… chenhaombb 第一次磷酸钙转染HEK293T,收取病毒,第二次病毒转染目的细胞。我觉得你先查查读码框是不是正确吧。 LoftyMan 不明miRNA大举进攻楼主的蛋白 birkin chenhaombb wrote:
基因编辑再次升级!领域大牛刘如谦 Cell 发文开发新工具,可安全高效进行体内基因编辑
(v1 BE-VLPs)的设计,他们融合了高度活跃的单碱基编辑工具 ABE8e,通过连接肽连接到逆转录病毒 FMLV 的 gag 多聚蛋白的 C 端,该连接肽在病毒颗粒成熟时被 FMLV 蛋白酶切割,从而释放 ABE8e 蛋白 RNP 复合物。 实验结果表明,v1 BE-VLPs 在 HEK293T 细胞的基因组位点实现高效递送和精准编辑,最高编辑效率大于 97%。这些观察结果表明,逆转录病毒 FMLV 支持了 BE-VLPs 的形成,v1 BE-VLPs 可以在体外有效地转导和编辑 HEK293T
9 可能促进脱靶效应,这阻碍了其应用于需要高精确度的基因组编辑。而 IDLV 适合递送 Cas9 组分至静息细胞,更适合临床研究,目前已有相关研究成果发表。 作者设计了针对 GFP 的靶点,分别以 LV、IDLV 感染 HEK293T 细胞,在第 7 天提取细胞做全外显子组测序(WES)分析,鉴定出了 16 个基因存在脱靶 4: 载体构建示意图 WES 鉴定脱靶的基因 LV 诱导的插入缺失的频率在 3.4%-24%(深线),而 IDLV 显示出较弱的诱导脱靶插入缺失的能力 0%-6.5%(浅线
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