人原代人宫颈成纤维细胞

人原代人宫颈成纤维细胞的基本特性：
（1）组织来源于正常新鲜组织。
（2）鉴定：Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
（3）原代细胞培养末期液氮冻存。
（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。
（5）Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

圻明生物原代细胞引种于：ATCC,武大细胞库，上海生化细胞所，中国科学院典型培养物保藏委员会等。 我们为全国广大客户提供优质的产品，完善的技术支持，过硬的质量保证。

操作指南及质量保证：
1. 细胞为三代以内，活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好，我们免费重新发货。
2. 实验过程中若确定是客户问题，客户需支付物流和耗材费用，我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。
3. 产品使用过程中，华拓生物可提供技术上的指导。

人原代人宫颈成纤维细胞细胞培养：细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5%CO2，湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；细胞于培养瓶或培养皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3㎜即可）。

人原代人宫颈成纤维细胞细胞传代：1.细胞培养至密度80%以上时即可传代，先将细胞培养基取出3ml用15ml离心管装好，其他培养基全部吸干舍弃；2.培养皿加入2-3ml无菌PBS，轻轻晃动，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍弃；3.加入1ml胰酶，轻轻晃动，使胰酶浸没到皿底所有部分，将皿盖好放入培养箱中消化；4.3分钟后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞不再贴壁，即可加入第一步收集的培养基混匀，若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至不贴壁为止；5.将细胞悬液均匀分成几份，分别加入不同培养皿中，补加新培养基后放回培养箱培养。

如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25或者离心管发货的细胞可以消毒后在培养箱过夜，干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80°冰箱，若干冰完全升华，需立即复苏细胞。

T25瓶或者离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要不可忽略。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm,5min），将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。

部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm,3min）收集细胞，用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。

D-Hank's平衡盐溶液（D-HBSS），不含钙、镁、酚红    500mL
D-Hank's平衡盐溶液（D-HBSS），不含钙、镁，含酚红    500mL
Hank's平衡盐溶液（HBSS），含钙、镁，不含酚红    500mL
Hank's平衡盐溶液（HBSS），含钙、镁、酚红    500mL
HEPES液（1M）    100mL
磷酸盐缓冲液（PBS）    500mL
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS），不含钙、镁、酚红    500mL
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS），含钙、镁、酚红    500mL
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS），含钙、镁，不含酚红    500mL
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS），含钙、镁、丙酮酸钠、葡萄糖，不含酚红    500mL
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS），不含钙、镁，含酚红    500mL
Earle's平衡盐溶液（EBSS），不含钙、镁、酚红    500mL
Earle's平衡盐溶液（EBSS），含钙、镁、酚红    500mL
Earle's平衡盐溶液（EBSS），含钙、镁，不含酚红    500mL
Earle's平衡盐溶液（EBSS），不含钙、镁，含酚红    500mL
台氏液（Tyrode's Solution）    500mL
改良台氏液（Advanced Tyrode's Solution），用于哺乳类心肌    500mL
改良台氏液（Advanced Tyrode's Solution），含HEPES    500mL
台氏液（Tyrode's Solution），无钙    500mL
任氏液（Ringer's Solution），用于两栖类    500mL
乐氏液（Locke's Solution）    500mL
乐氏液（Locke's Solution），低钙    500mL
阿氏液（Alsever's Solution）    500mL
阿氏液（Alsever's Solution）    100mL
Krebs-Ringer液    500mL
克-亨氏液（Krebs-Hensleit's Solution）    500mL
豚鼠支气管液（Thoroton's Solution）    500mL
大鼠子宫液（De-Jalon's Solution）    500mL
0.65%生理盐水    500mL
0.75%生理盐水    500mL
0.9%生理盐水    500mL
D-葡萄糖溶液（200g/L）    100mL
L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液（200mM），100×    100mL
L-谷氨酰胺溶液（200mM），100×    100mL
7.5%碳酸氢钠溶液    100mL
丙酮酸钠溶液（100mM），100×    100mL
0.4%台盼蓝染色液（Trypan Blue Solution）    100mL
MEM非必需氨基酸溶液（NEAA），100×    100mL
MEM氨基酸溶液（50×）    100mL
MEM维生素溶液（100×）    100mL
重组人胰岛素溶液（10mg/ml）    10mL
重组人胰岛素溶液（10mg/ml）    5mL
重组人胰岛素溶液（10mg/ml）    1mL
通用血清型程序冻存液    50mL
通用血清型程序冻存液    100mL
超滤水，细胞培养级    500mL
MTT溶液（5mg/mL）    10mL
MTT溶液（5mg/mL）    5mL
磷酸盐缓冲液（PBS）10×    500mL
多聚-L-赖氨酸溶液（10×）    10mL
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS）10×，含钙、镁，不含酚红    500mL
Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS）10×，不含钙、镁、酚红    500mL
HAT添加剂（50×）    10mL
HT添加剂（50×）    10mL
β-巯基乙醇（55mM），1000×    100mL
β-巯基乙醇（55mM），1000×    10mL
Nanofecter转染试剂    0.5mL
Nanofecter转染试剂    1mL