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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
10
- 细胞类型：
见说明书
- 组织来源：
见说明书
- 物种来源：
人大小鼠等
- 免疫类型：
见说明书
- 细胞形态：
见说明书
- 运输方式：
原代冻存干冰运输，传代室温运输
- 年限：
一年
- 生长状态：
见说明书
- 规格：
1×106cells/T25培养瓶
培养操作及注意事项说明
一．产品简介
1、细胞名称：HEPG2；人肝癌细胞
2、生长特性： □ 贴壁 □ 悬浮 □半悬浮半贴壁
3、细胞生长条件：
| 培养条件 | DMEM（高糖）+10%FBS+1%双抗 |
| 温度 | 37℃ |
| 空气条件 | 5% CO2，,95% AIR |
| 传代方法 | 1:2传代，2~3天换液 |
| 冻存条件 | 90%FBS+10%DMSO |
4、背景资料：该细胞来源于一名15岁的白人少年的肝癌组织。该细胞表达甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、转铁蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、纤溶酶原、补体C4、C3激活物、纤维蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、视黄醇结合蛋白；表达胰岛素受体和胰岛素样生长因子IGFⅡ的受体；该细胞具有3-羟基-3-甲酰辅酶A还原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未证明该细胞中有HBV基因组。
二．使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
附:
T25瓶细胞处理方法
收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题，请即时联系。并进行以下操作：
- 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。
- 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。
- 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。
- 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。
- ①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上，进行传代。
注：
培养瓶里的培养基血清浓度为5%，建议更换成自己配好的新鲜培养基。由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基。（这里是针对原来完全培养基FBS浓度是10%的情况，如果原来FBS浓度是20%，可以增加到25%FBS浓度） 收到细胞后如细胞状态不佳或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系并提供图片，以便售后处理。7天内反馈，细胞本身问题免费重发如人为原因导致可根据实际情况酌情处理；7天内未接到任何反馈视为合格，不予免费售后。
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