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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博生产销*(代"售")的猪源性成分荧光PCR检测试剂盒厂商,是高品质的物种PCR检测试剂盒产品,欢迎的您垂询订购。
名称:猪源性成分荧光PCR检测试剂盒
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:SYA294
等级:科研试剂
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对猪源性成分特异性引物,结合一条特异性荧光探针,用荧光PCR技术对猪源性成分DNA进行体外扩增检测。本试剂盒中猪源性成分的探针报告基团为FAM。
二、用途:
该试剂盒适合于各种饲料及其它样品中猪源性成分的检测。
三、试剂盒组成:(40T/Kit)
组份 数量 规格
猪物种荧光qPCR反应液(Pork-qPCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(Pork-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Bio-Rad系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品采集与DNA提取
6.1 样品采集
样品的采集与预培养按照样品的采集按照国家标准《饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求进行。
6.2 DNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取DNA。
6.2.1 动物组织、食品或饲料:直接取约50mg上述材料,匀浆后置入洁净的1.5mL离心管中,加50μl DNA抽提液充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃15min,4℃降温5min,13000rpm离心5min,取上清液5μL进行PCR反应。
6.2.2 血液:取500μL摇匀的抗凝血转至一洁净的1.5mL离心管中,加入1mL双蒸水,剧烈震荡30s,8000rpm离心5min,弃上清。重复清洗至无明显红色沉淀。加入1mL生理盐水,剧烈震荡15s,10000rpm离心5min,弃上清。沉淀加50μl DNA抽提液并与沉淀混匀,100℃恒温15min,4℃降温5min。13000rpm离心5min,取上清5μL进行PCR反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Pork-qPCR MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Pork-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(Pork-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明猪源性成分核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明猪源性成分核酸阴性。
(3)如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行猪源性成分qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明猪源性成分核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
关键词:百奥莱博,SYA294,猪源性成分荧光PCR检测试剂盒
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