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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
呼肠孤病毒荧光PCR检测试剂盒北京价格由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多呼肠孤病毒荧光PCR检测试剂盒等病毒PCR检测试剂盒产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:呼肠孤病毒荧光PCR检测试剂盒北京价格
产地:国产|进口
编号:SYA767
品牌:百奥莱博
等级:科研试剂
一、简介:
本试剂盒用一对呼肠孤病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用一步法荧光qRT-PCR 技术对呼肠孤病毒核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适用于检测咽拭子等样本中的呼肠孤病毒(AR)的特异性检测。用于呼肠孤病毒(AR)感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
呼肠孤病毒反应液(AR - qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(JEV-PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR 仪器适用范围
ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列,博日系列及其他荧光定量PCR 检测仪。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6 个月。
六、样品采集、前处理与RNA 提取
6.1 样品采集
采集禽的咽拭子标本,应使用专用采样拭子,适度拭抹咽后壁和扁桃体部位,应避免触及舌部,迅速将拭子放入标本采集管中,旋紧管盖并密封,以防干燥。
6.2 样本前处理:
6.2.1 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。
棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.2.2 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.3 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL 加入到反应体系中即可。由于
阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR 反应液(AR- qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR 反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(AR-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 94℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(AR-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明呼肠孤病毒核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明呼肠孤病毒核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行呼肠孤病毒qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明呼肠孤病毒核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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·东部/西部/委内瑞拉马脑炎病毒三重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA251
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪口蹄疫病毒O型抗体ELISA检测试剂盒
编号:SYA633
等级:科研实验专用
规格:192次/盒|480次/盒
·禽流感病毒H3亚型(AIV-H3)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA384
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对禽流感病毒H3亚型特异性引物,结合特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对禽流感病毒H3亚型RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中禽流感病毒H3亚型的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。
二、用途:
本试剂盒适用于鼻咽提取物、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液等临床样品中禽流感病毒H3亚型的特异性检测。适用于禽流感病毒H3亚型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
禽流感H3荧光qRT-PCR反应液(H3-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(H5-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
6.2.1 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管,做好标识。
6.2.2 加入600 μL裂解液,200 μL样本,200 μL*仿,混匀器上振荡5 s,4℃ 12000 rpm离心15 min。
6.2.3 吸取步骤6.2.2中的上清液转移至新的无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管中(避免吸出中间层),加入400 μL异丙醇,颠倒混匀。
6.2.4 4℃ 12000 rpm离心15 min,弃上清;加入600 μL 75%乙醇。
6.2.5 4℃ 12000 rpm离心10 min,弃上清。打开离心管管盖,室温干燥5 min-10 min。
6.2.6 加入10μL 无核酸酶水,溶解管底的RNA,5000 rpm离心5 s,-20℃保存。若长期保存需放置-80℃冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(H3-qRT-PCRMIX)、酶混合物(EnzymesMIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(H3-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为HEX/VIC/JOE,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(H3-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明H3核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明H3核酸阴性。
(3)如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行H3qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明H3核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
呼肠孤病毒荧光PCR检测试剂盒北京价格关键词:SYA767,呼肠孤病毒荧光PCR检测试剂盒,百奥莱博
·布鲁氏杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA115
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适用于检测头部、乳腺、生殖器淋巴结、脾、怀孕后期或生产后早期的子宫、乳房组织、流产的胎儿组织、胎膜、阴道分泌物、精液、关节炎和水囊瘤液等样本中的布氏杆菌(BS),用于布氏杆菌(BS)感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
本试剂盒用一对布氏杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对布氏杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
试剂盒组成:
| 组份 | 数量 | 规格 |
| 布氏杆菌反应液(BS-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 布氏杆菌阳性对照(BS-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃以下,有效期6个月。
使用方法:
一、样品采集:死亡或扑杀动物,取头部、乳腺、生殖器淋巴结、脾、怀孕后期或生产后早期的子宫、乳房组织、流产的胎儿组织、胎膜、阴道分泌物、精液、关节炎和水囊瘤液。
二、样品处理:
➤组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;
➤阴道拭子样品、精液、关节炎和水囊瘤液直接取100μL于1.5mL灭菌离心管中。
三、DNA提取:
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
四、检测步骤:
1.试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BS-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 14µL | N×14µL |
| 酶液 | 1µL | N×1µL |
| 总量 | 15µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BS-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
2.qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min | |
| 预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
五、结果分析:
1.结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2.试验成立判定
➤阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(BS-PTC):均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
3.结果判定
➤在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明BS核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明BS核酸阴性。
➤如果35<Ct值,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行BS qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明BS核酸阳性;否则判为样本阴性。
六、注意事项:
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
呼肠孤病毒荧光PCR检测试剂盒北京价格关键词:SYA767,呼肠孤病毒荧光PCR检测试剂盒,百奥莱博
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