甲型/乙型/丙型流感病毒三重荧光PCR检测试剂盒价格

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北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括甲型/乙型/丙型流感病毒三重荧光PCR检测试剂盒价格在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：甲型/乙型/丙型流感病毒三重荧光PCR检测试剂盒价格
产地：国产|进口
编号：SYA169
品牌：百奥莱博
等级：科研试剂
规格：48次/盒

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·流感N9亚型病毒(AIV-N9)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA531
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·高致病猪蓝耳和猪蓝耳(hp-PRRSV/PRRSV)通用型(二合一)荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA468
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·高致病性猪蓝耳和猪蓝耳(hp-PRRSV/PRRSV)通用双重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA563
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感H7N7病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA157
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·鸡白痢沙门氏菌(SPP.P)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA543
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·小肠结肠炎耶尔森菌/弯曲菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA099
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒(HKU)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA180
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感病毒(AIV)通用单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA534
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·甲型H1N1/甲型流感病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA166
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对甲型流感病毒特异性引物，一对甲型H1N1特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR技术对甲型流感病毒RNA、流感H1N1病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中甲型流感病毒的探针报告基团为VIC/HEX/JOE，流感H1N1病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于检测各种咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、组织样品等临床样品中甲型流感病毒和H1N1亚型流感病毒。可用于甲型流感病毒和H1N1亚型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

二、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
甲型流感/H1N1荧光qRT-PCR反应液(IAV-A/H1N1-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(IAV-A/H1N1-PTC) 1 管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI7500荧光定量PCR检测仪。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 样品RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光RT-PCR反应液(IAV-A/H1N1-RT-PCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1 µL N×1 µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(IAV-A/H1N1-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。总体系20µL。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号 报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测H1N1，VIC/HEX/JOE基团检测IAV-A，淬灭基团均为None，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道全部阴性。
（2） 阳性对照(IAV-A/H1N1-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） FAM通道：Ct值≤35 H1N1亚型流感病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明H1N1亚型流感病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明H1N1亚型流感病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。
（2） HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35 甲型流感病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明甲型流感病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明甲型流感病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·鸡白痢沙门氏菌(SPP.P)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA387
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪乙型脑炎抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA639
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·肠出血型大肠杆菌EHEC O157/H7双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA104
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·鼠源性成分单重荧光PCR检测试剂盒(定量)
编号：SYA307
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪附红细胞体病ELISA检测试剂盒
编号：SYA642
等级：科研实验专用
规格：96次/盒

·恶性疟原虫/间日疟原虫核酸双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA137
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·流感N9亚型病毒(AIV-N9)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA531
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·札如病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA203
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪弓形虫抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA640
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·偏肺病毒(HMPV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA185
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·嗜水气单胞菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA077
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·小肠结肠炎耶尔森菌/弯曲菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA099
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA087
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的肠出血性大肠杆菌溶血素基因，用于肠出血性大肠杆菌溶血素基因的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

本试剂盒用一对肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
Hly反应液(Hly-qPCR MIX)	1管	960μL/管
核酸提取液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(EnzymHly MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	250μL/管
Hly阳性对照(Hly-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集及处理：
1．水样便取0.5-1mL；疑似污染的食物取1g。
2．水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。

二、DNA提取：
对上述处理好的样本加入等体积的核酸提取液(固体标本加入50uL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Hly-qPCR MIX)、酶混合液(EnzymHlyMIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	20µL	N×20µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	21µL	N×21µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Hly-PTC)4μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

预变性	1循环	94℃ for 2 min
PCR扩增	40循环	94℃ for 15 sec 55℃ for 30 sec

在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(Hly-PTC)：均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
➤在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，且有明显的指数增长曲线，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阴性。
➤如果35＜Ct值，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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