SYA217型轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒

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SYA217型轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒等病毒PCR检测试剂盒产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：SYA217型轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒厂家
编号：SYA217
品牌：百奥莱博
规格：48次/盒
等级：科研试剂
产地：国产|进口

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·非洲猪瘟病毒(ASFV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA421
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对非洲猪瘟病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对非洲猪瘟的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染动物的病原学诊断。

二、用途：
本试剂盒适用于动物病料、鼻咽拭子、血液等样本中非洲猪瘟病毒的特异检测。适用于非洲猪瘟病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。最低检测限：500copies/mL，稳定性：批内及批间差异系数≤3% 。

三、试剂盒组成：(48T)
小盒(扩增试剂盒)

 

组份	数量	规格
非洲猪瘟病毒荧光qPCR反应液(ASFV-qPCR MIX)	1管	672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
阳性对照(ASFV-PTC)	1管	50μL/管

大盒(提取试剂盒)

组份	规格	数量
FD1试剂	15mL/瓶	1瓶
FD2试剂	500μL/管	1管
FD3试剂	15mL/瓶	1瓶
FD4试剂	30mL/瓶	1瓶
FD5试剂	2mL/管	2管
吸附柱及收集管	48套/包	1包

四、储存条件及有效期
小盒于-20℃以下保存，有效期为6个月；大盒室温避光保存，有效期12个月。

五、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无DNA酶污染的离心管中备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.2 DNA提取
请查看配套提取试剂盒说明书
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(ASFV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
ASFV反应液	14µL	N×14µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(ASFV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(ASFV-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(2)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明ASFV核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明ASFV核酸阴性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行ASFV qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明ASFV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


SYA217型轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒厂家关键词：SYA217,百奥莱博,轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒


·冠状病毒(NL63)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA182
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·马铃薯转基因Cry3c单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA285
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪流感病毒N2亚型(SIV-N2)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA457
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·季节性H1流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA148
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·肠产毒性大肠杆菌(ETEC)耐热肠毒素(ST-elt)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA090
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·转基因植物NOS终止子单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA277
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·诺如病毒G1型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA201
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪传染性萎缩性鼻炎(SAR)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA441
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·流感病毒N1型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA161
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·三日疟原虫/卵形疟原虫核酸双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA138
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·副伤寒杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA012
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for Bacillus paratyphosus
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·甲型H3N2流感病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA150
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for Bacillus paratyphosus
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对甲型H3流感病毒特异性引物，一对甲型N2流感病毒特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR技术对甲型H3流感病毒RNA、N2流感病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中甲型H3流感病毒的探针报告基团为FAM，N2流感病毒的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、组织样品等临床样品中甲型H3流感病毒和N2流感病毒的特异性检测。适用于甲型H3N2流感病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
H3N2荧光qRT-PCR反应液(H3N2-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
H3N2阳性对照(H3N2-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为9个月，反复冻融次数不宜超过5次。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Stratagene MX系列，Bio-Rad系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(H3N2-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(H3N2-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和HEX/VIC/JOE。其中FAM基团检测H3，HEX/VIC/JOE基团检测N2，淬灭基团均为None。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值＞43或无Ct值。
（2） 阳性对照(H3N2-PTC)：FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值≤30且有明显指数增长。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
8.3 结果判定
（1） FAM通道：Ct值≤40，H3亚型流感病毒核酸为阳性；Ct值＞43或无Ct值为阴性样本，表明H3亚型流感病毒核酸阴性。Ct值在40-43个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明H3亚型流感病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。
（2） HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤40，N2亚型流感病毒核酸为阳性；Ct值＞43或无Ct值为阴性样本，表明N2亚型流感病毒核酸阴性。Ct值在40-43个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明N2亚型流感病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



SYA217型轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒厂家关键词：SYA217,百奥莱博,轮状病毒A/B/C分型三重荧光PCR检测试剂盒


·副结核(paratuberculosis)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA503
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽白血病(ALV)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA537
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·玉米转基因GA21单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA282
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·牛结核杆菌病γ干扰素ELISA检测试剂盒(确证)
编号：SYA652
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·呼吸道合胞病毒(RSV)A亚型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA172
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猫源性成分单重荧光PCR检测试剂盒(定量)
编号：SYA308
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·丙型流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA164
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·H5/H7/H9型禽流感病毒三重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA170
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·小双节RNA病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA208
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·大豆特异性基因Lectin单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA274
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适用于检测植物中特异性基因Lectin，用于筛查待检测植物中是否含有Lectin基因片段DNA成分。其检测结果仅供参考。

本试剂盒用一对大豆特异性基因Lectin特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR技术进行大豆特异性基因Lectin的检测。

试剂盒组成：

组份	数量	规格
Lectin反应液(Lectin-qPCR MIX)	1管	672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
Lectin阳性对照(Lectin-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃，应避免反复冻融，有效期12个月。

使用方法：

一、样品采集及处理：
➤适用标本类型：植物组织及其加工制品。
➤样本采集：称取200g样品。

二、DNA提取：
样品需用粉碎机或冷冻研磨仪研磨至细粉末状。
用户可采用SN/T2584-2010中推荐的方法提取DNA，也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的植物基因组DNA提取试剂盒(过柱法)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．PCR扩增
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Lectin-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶混合物	1 µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Lectin -PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(Lectin -PTC)：均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
➤在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明Lectin核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明Lectin核酸阴性。
➤如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行Lectin qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明Lectin核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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