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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
496
- 英文名:
Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue
- 保质期:
1年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T|100T
特别提示:包括组织/细胞线粒体分离试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:组织/细胞线粒体分离试剂盒
英文名称:Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue
产品货号:SY0328
产品规格:50T|100T
线粒体是绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器,是细胞的动力工厂,细胞进行氧化磷酸化的场所。因此,对线粒体进行分离,以此为对象,对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。
本试剂盒可用于快速便捷分离组织/细胞线粒体,获得的线粒体纯度较高,且绝大部分都含有完整的内膜和外膜,可用于线粒体的生理功能等方面的研究,得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白,从而用于后续SDS-PAGE、Western、双向电泳及免疫共沉淀等分析。
按照每个样品使用量(细胞1-5×107个;组织:100-200 mg),本试剂盒可分别进行50个个样品的抽提。
试剂盒组份:
试剂A:100ml
试剂B:50ml
试剂C:1ml
储存条件:-20℃,有效期1年。
使用方法
1 线粒体的抽提
1)样本处理
① 组织匀浆:称取100-200 mg新鲜组织,PBS或生理盐水冲洗干净,滤纸吸干,用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1-2.5mL冰预冷的试剂A,混匀,孵育8-10min,匀浆10-30下左右,也可采用超声方法破膜。
② 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 g 离心5-10 min收集细胞。计数,每次提取需要1-5×107个细胞,加入1-2.5mL预冷的试剂A,重悬细胞,混匀,孵育8-10min,可以采用超声或匀浆器方法破膜。
2)将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4 ºC,800 g 离心5 min。
【注】:细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。
3)收集上清液并转移到新的离心管。4 ºC,800 g 再次离心5 min。弃沉淀。
4)将上清液转移到新的离心管。4 ºC,12,000×g 离心10 min,小心去除上清,沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
【注】:离心后的上清含胞浆成分,尽量除去上清。
2 线粒体蛋白的抽提
1)向每毫升预冷试剂B加入10μL试剂C混匀。冰上保存数分钟待用。
2)按每10μL线粒体压积中,加入100μL上述配制好的试剂B/C溶液。
3)置于4℃旋涡振荡15-30 min 。
4)10,000rpm,4℃离心15min,取上清,即为线粒体全蛋白提取物,进行蛋白定量。
5)分装保存于-70℃,避免反复冻融。
我公司销售的组织/细胞线粒体分离试剂盒优惠促销,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验在 RIPA 不可溶组分中,如果样品又是研磨困难的组织样品,则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上(内质网,高尔基体,溶酶体,线粒体,内体等)表达,且蛋白表达量较低,若用总蛋白检测时条带较弱,则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测,提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程,推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离,将样品分离为不同组分如分成细胞核,细胞浆,细胞
等渗的提取缓冲液(带或不带还原剂和蛋白酶抑制剂)来维持感兴趣的细胞器。有时也需要机械裂解或去污剂裂解。“各个不同供应商在细胞分级分离试剂盒的设计上都是一致的,而不同细胞组分的差异在于缓冲液组成、裂解试剂和离心速度,”Moehlenbrock说。 此类试剂盒的价值并不在于某些秘密试剂,而在于QC系统的一致性和重复性。“细胞分级分离的方法已经过充分鉴定,其操作步骤适用于大部分应用,”Moehlenbrock说。“商业化试剂盒为最终用户带来了简便和效率,同时提供了品质保证的安全
RIPA或线粒体分离试剂 蛋白抽提试剂盒的选择蛋白抽提试剂盒的出现弥补了细胞裂解液的应用局限性,特别是针对难提取的样本或者亚细胞器蛋白的提取,例如:针对植物、动物组织/细胞、细菌、酵母等不同样品及细胞核、细胞膜、线粒体、叶绿体、溶酶体等不同亚细胞器的专业提取试剂盒。这类特化试剂盒能够针对目的蛋白的不同来源和不同组织定位进行裂解和提取, 简化实验操作的同时还能提高蛋白提取的得率。以 Sigma 公司的 CelLytic?系列蛋白提取试剂盒为例:一方面,该系列试剂盒有非变性的裂解
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