SY0076型ISRE-Luc荧光素酶报告基因质粒厂家直销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

SY0076型ISRE-Luc荧光素酶报告基因质粒厂家直销由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多ISRE-Luc荧光素酶报告基因质粒等报告基因检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：SY0076型ISRE-Luc荧光素酶报告基因质粒厂家直销
英文名：ISRE luciferase reporter plasmid
品牌：百奥莱博
规格：1μg
产地：国产|进口
ISRE荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（ISRE luciferase reporter plasimd）是用于检测ISRE转录活性水平为目的的报告基因。

ISRE（interferon stimulated response element）报告基因主要用于检测干扰素诱导的信号转导通路在细胞中的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMISRE-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个ISRE结合位点，可以高灵敏度地检测ISRE的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得ISRE报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1.pGMISRE-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
2.ISRE的激活剂，可作为ISRE报告基因的阳性对照。

储存条件：-20℃。

关于SY0076型ISRE-Luc荧光素酶报告基因质粒厂家直销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·植物组培抗菌剂
编号：SY0624
英文名称：Plant Preservative Mixture (PPM)
规格：25ml
植物组织培养可以依阶段区分为：一、引发愈伤组织( callus )，因为只有callus可以进行组织培养。 二、从callus诱导成根或芽。组培的方式可以分为3种：1）固体培养，将植物组织放置于固体培养基上，通常培养在玻璃瓶或塑胶瓶内。2）平板培养，将植物组织埋于固体培养基中，并且培养在培养皿。3）液体培养，将植物组织培养在液体培养基中，一般来说培养在生物反应器内，可以再细分为静止培养、悬浮培养和漂浮培养。在整个组织培养的过程，最担心的就是微生物的污染，所以用于植物组织培养的抗菌与抗真菌剂是非常必须的。

植物组培抗菌剂（Plant Preservative Mixture, PPM）是一种广谱抗微生物剂，可以杀死细菌和真菌细胞，防止真菌孢子的萌发，并在较高浓度下能消除内源性污染的外植体。研究表明PPM活性成分可以穿透真菌或细菌细胞壁，抑制柠檬酸循环和电子传递链等中心代谢循环中的关键酶的活性，并且可以抑制培养基中的单糖和*基酸向真菌和细菌细胞的运输。PPM能有效地抑制植物细胞和植物组织培养中的通过空气、水、人传播的微生物污染及内源性污染，而不会影响体外种子发芽、愈伤组织增殖和愈伤组织的再生。

与普通的抗生素相比，优势体现在：
1）是一种广谱、高效抗菌/抗真菌剂。
2）比常用抗生素价格更低廉，可以作为植物组织培养基的标准成分，并可作为常规使用。
3）因为它的靶标是抑制多种酶，所以产生抗耐药性的突变体是不可能的。
4）具有热稳定性，可以和培养基一起灭菌。

使用方法

以下所述的操作流程是通用的，可能需要根据待处理的特定物种稍作改动。
1）含有PPM的培养基可以在超净台外面分装，即无需无菌操作，等琼脂凝固后把盖子盖好。如果用泵来分装培养基，建议在分装前后先用高压灭菌处理的热水清理导管/软管。

2）如果储存在无菌容器或在此之前储备液未受污染，含PPM的热敏感或热稳定的液体培养基无需经微孔滤膜或高压灭菌处理。但是对于含有200 mg/L或更多*基酸或蛋白质的富集培养基，建议加入PPM后用滤膜过滤处理。

3）超净工作台里的器具（镊子或解剖刀）无需在火焰上烧，只要定期地在70%酒精里蘸一下即可。超净工作台无需验证，可以在超净工作台外面的干净台面上操作，不超过一小时即可。

4）PPM溶液呈酸性，pH 3.8，需保存在4℃。低接种密度下推荐工作剂量0.05-0.2%（v/v），可在灭菌前或灭菌后加入培养基，防止通过空气传播污染或内源性污染。处理内源性污染或获得无农杆菌的植物材料需要高剂量的PPM。

5）对于一些常规情况下表皮上被大量细菌或真菌孢子污染的种子来说，PPM的抗菌效率可能比较弱。对于体外萌发实验，种子应该按照传统的方法先用漂白剂进行表面消毒。因此，在含有PPM的萌发培养基里，在一个非灭菌的容器中种子可以在自来水下冲洗然后在超净台中吹干。如果所使用的器具末端接触到活性细菌、真菌组织或其它怀疑被污染的东西，这些器具应该通过高压或电子加热设备进行灭菌。

6）一般剂量水平：
除了内源性污染以外，推荐剂量是0.05-0.2%。对于愈伤增殖、器官形成和胚胎形成，推荐的剂量范围是0.05-0.075%。低接种密度或者处理缓慢生长的细菌条件下，在培养基灭菌前或灭菌后加入此剂量的PPM，可防止空气传播的污染和内源性污染。要消除更高密度的内源性污染，需要增加PPM的剂量（参考7-内源性污染）。

7）内源性污染
a. 对于外植体：以1cm（或更短）外植体为例，添加4~5% PPM到完全MS基础盐中，但千万不要添加Tween 20和 pH调整剂，搅拌4~12小时之后直接拿出。不用清洗，直接插入含有PPM的培养基里，若是草本植物换至0.05~0.1%PPM的萌发培养基即可；而木本植物则换至0.2% PPM的萌发培养基。
注意：以下从第7段（b）到10用于观赏植物。
b. 对于块茎，球茎和鳞状物：把整个块茎/球茎/鳞状物在漂白剂里摇或搅拌。然后用水冲洗（可以在非无菌条件下操作）。把块茎/球茎切成小片，在含有4-5%PPM的全基盐中摇或搅拌12-24 h，不要加pH调整剂和Tween 20。不用冲洗直接插入到含有0.1-0.2% PPM的培养基中。

8）如果按照以上操作流程没有取得满意的结果（尤其是厚的和非常密集的外植体、种子），我们建议按照以下流程：
a. 在水中摇或搅拌外植体（较软的组织1h，较坚硬的组织2h）；
b. 在含有50% PPM的完全MS基础盐中（不加pH调整剂和Tween 20）摇或搅拌5-10 min。
c. 无需冲洗，直接把处植体插入到培养基中。如果真菌污染，可以选择额外再加入PPM到培养基中。
然而，对于细菌或混合污染，第一个月在培养基中加入0.05-0.2%的PPM是必要的。不要丢弃高度氧化的外植体，因为大约50%的外植体在4-6周内即可恢复正常。

9）为了消除“组培中”污染的植物材料（抢救措施）：
注意：仅适合明显观察到受污染不超过一周的组织。
a. 在自来水细水流下面用牙刷清洗材料。在含有50% PPM（用灭菌水稀释）中摇或搅拌5-15 min。对于细菌或混合污染，我们建议用低pH值2.8-3.2的溶液，即100% PPM与0.6g/L的柠檬酸溶液（用灭菌水）按1：1混合。
b. 不用冲洗直接把处理好的材料插入到含有0.05-0.2% PPM的培养基里，培养至少一个月。前10天弱光培养，如上所提，不要丢弃高度氧化的外植体，等4-6周以后将约有50%的材料恢复。
对于真菌孢子或细菌位于外植体极深的部位，而PPM无法接触到的情况，需要把材料在水中浸泡一段时间，然后沿着外植体切片，在50% PPM中摇或搅拌5-15 min。通过以上消毒步骤，保证PPM能够充分接触到外植体的整个表面。

10）去除农杆菌：
共培养之后，用水冲洗叶盘。然后把转染的叶盘在含有100% PPM的完全基础盐中蘸（整个叶盘）约2 min。 用两张无菌纸巾吸干放到含有常用抗生素的培养基上。三周后，转到只含有0.05-0.075% PPM的培养基上。

注意事项

1）采用PPM消毒后首次转移的材料，我们建议把外植体完全地插入半固体培养基中。
2）50% PPM溶液能重复利用大约5-10次。重复利用的次数取决于所处理外植体的体积和接种密度。保存50% PPM在4℃以延长它的活性。如有必要，准备两种PPM消毒液：一种是灭菌内源性污染，第二种是灭菌“组培中”的污染。用第二种消毒溶液处理材料后都要用0.2 μm的滤膜滤灭，滤灭过程可以非无菌条件下完成。一个滤器能用于溶液滤灭的整个过程。
3）如果用50% PPM处理材料效果仍不佳，可以用100% PPM。处理方法跟50% PPM相似，但处理时间不要超过10 min。
4）PPM 的使用为任何一个组织培养实验室带来便利，并极大地提高技术人员和实验室的工作效率。但每个实验室的工作条件不同可能使得PPM效力的发挥具有一定的波动性。建议工作人员根据以上步骤操作的前提下，并进行优化调整以确认PPM效力发挥的最佳工作条件，或者确认PPM是否能满足其特定的应用要求。整体来说，PPM是能够非常有效的预防植物样本受到的空气污染，水介质污染以及人源接触带来的各种污染。使用得当，PPM可以拯救内源性污染的外植体；推荐剂量（0.05-0.2%（v/v））下PPM几乎不造成任何负面损伤。

储存条件：4℃


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·27mm透析袋(透析分子量3.5kDa)
编号：SY0411
英文名称：Dialysis Tube MD34 (Mw3,500)
规格：1卷（5米）
透析袋通常为半透膜制成的袋状，以此为屏障对目的蛋白进行脱盐以及进行缓冲液的置换，透析的主要原理是：透析袋内样品的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到透析袋外，直到透析袋内外两边的浓度达到平衡为止。透析袋透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析袋透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析。

本透析袋参数：扁平宽度为34mm，直径27mm，截留分子量3.5kDa。
储存条件：4℃，有效期2年。

注意事项
1）每次使用后将余下的膜放回袋子并密封好，以防干裂。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
1）把透析袋剪成适当长度（10-20cm）的小段，具体长度需根据待透析的样品而定。
2）在大体积（eg.500mL）的2%（W/V）的碳酸**和1mmol/L EDTA (pH=8.0)中将透析袋煮沸10min。
3）用蒸馏水彻底清洗透析袋。
4）放在大体积（eg.500mL）的1 mmol/L EDTA (pH=8.0)中将之煮沸10min。
5）冷却后，存放于4℃，必须确保透析袋始终浸没在溶液内。
【注】：从此时起取用透析袋必须戴手套。
6）在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗干净。
7）使用时，一端由透析夹夹紧，另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液。
【注】：
① 通常要留1/3～1/2的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大或样品含盐量较高时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。
② 为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用转子边搅拌边透析。透析的容器要大，如大烧杯等。


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·聚凝胺
编号：SY0605
英文名称：Polybrene (hexadimethrine bromide)
规格：500ul
聚凝胺是一种多聚阳离子聚合物，常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强脂质体的转染效率。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的基因转染，慢病毒介导的基因转染，作用机理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。Polybrene也是一种有名的抗肝素剂（肝素拮抗剂），常用来生产非特异性凝集的红细胞。另外Polybrene也多用于蛋白测序，因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。

本产品为即用型溶液，粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液，并用0.22μM滤膜过滤除菌。使用时一般按1:1000-1：2000稀释，依细胞种类不同稀释比例不同，具体查阅相关文献。
注：Polybrene对某些细胞（如末端分化的神经元，DC细胞）毒性较大，初次应用建议先做毒性测试。

操作步骤(仅供参考，具体使用浓度请参考相关文献)

实验1：逆转录病毒感染（Retroviral Infection）
（1）重组逆转录病毒原液的制备：取5ml生长培养基（5%血清）加入约含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45μm滤器过滤。
（2）待感染细胞的培养：100mm培养盘内加入10ml完全培养基，细胞密度为5×105/盘。
（3）病毒感染：细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2ml病毒上清 （或将病毒原液稀释到2ml）感染细胞，polybrene的终浓度为5μg-10μg/ml。37℃孵育3-6h。
（4）收集病毒颗粒：加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

实验2：转染
（1）完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%；
（2）孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基- Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：①添加完全培养基（60mm培养皿2ml，100mm培养皿3ml），37℃预热；②添加10ng~10µg质粒轻轻混匀；③加入Polybrene至终浓度为5μg-10μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。
（3）去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37℃孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h轻柔混匀。
（4）去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）轻轻盖住细胞（60mm培养皿3ml，100mm培养皿4ml）。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。
（5）立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。
（6）加入完全培养基到细胞中；
（7）稳定转化：去除生长培养基，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。
瞬时表达：去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获细胞。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期2年。

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