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北京百奥莱博科技有限公司
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北京百奥莱博供应的肽 N-糖苷酶 F(无甘油),重组酶现货用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多肽 N-糖苷酶 F(无甘油),重组酶等分子生物学试剂产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:肽 N-糖苷酶 F(无甘油),重组酶现货
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
规格:75KU|15KU
编号:SV1495
特性:
去除糖蛋白的 N-连接糖
概述:
肽 N-糖苷酶 F,即 PNGase F,是一种酰*酶,可以在 N-连接糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分最内侧的 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰*残基之间进行切割。PNGase F 还以不含甘油的形式提供,便于在 HPLC 方法中取得最佳效果。
来源:
从脑膜败血性黄杆菌(Flavobacterium meningosepticum)中提取纯化。
反应条件:
将糖蛋白于 1X 糖蛋白变性缓冲液(含 0.5% SDS,40mM DTT)中 100℃ 煮沸 10 分钟使其变性,再在加入1% NP-40 的 1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中,37℃ 温育进行反应。热失活:75℃ 10 分钟。
随酶提供的试剂:
10X 糖蛋白变性缓冲液
10X GlycoBuffer 2 缓冲液
10% NP-40
分子量:
36,000 daltons。
质量保证:
无糖苷外切酶污染,无糖苷内切酶 F1、F2和 F3 活性,无蛋白水解活性。
单位定义:
1 单位指 10 μl 的反应体系中,37℃ 条件下 1 小时 从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95%的碳水化合物所需要的酶量(65 我公司units = 1 IUB milliunit)。
浓度:
500,000 units/ml。
注意事项:
已知 PNGase F 的活性受 SDS 的抑制,所以在反应混合物中必须加入 NP-40。
要使天然糖蛋白去糖基化,建议增加酶量并延长温育时间。
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文献和实验,不易过滤,而且机械性能不好,易于破碎。有人采用了另外一类办法。例如,①采用高达20%交联度的PS树脂。这种树脂的内部网格很小,类似于实心球。因此,肽链的接长反应只能在树脂表面上进行。②以玻璃珠或聚乙烯醇(PVA)为内核,聚合上一层低交联或无交联的PS。③用20%交联的PS珠体为核心,再在表面聚合上一层低交联的PS制成表层树脂或者在Kel-F上进行幅照接技。但①和②的应用较果并不理想。1.2 反应基团的导入上面的聚合物是起支撑和载带作用,并不能直接连上(第一个)氨基酸,必须要在苯环上导入反应
。因为Cys、Met、Trp或者其侧链很容易氧化。如果可能的话应尽量避免这些残基在序列中出现,或者做一些保守的替换。例如,用Ser代替Cys,Norleucine代替Met,Tyr、Phe或其他一些疏水性残基如Leu代替Trp。Lys可以用来代替Arg。 改善溶解性的多肽序列的设计方案1. 改变序列的N或C端对酸性肽(即在中性条件下多肽带负电荷),我们推荐多肽为这样的形式:Acetyl-peptide-COOH(多肽N端乙酰化,C端自由羧基),以使多肽尽可能多的带负电荷。对碱性肽(即在中性条件下多肽
的多肽在打开盖子后易凝结,从而降低了多肽产品的稳定性。称重: 迅速称取您所需的多肽,并将剩余多肽继续储存在 - 20°C 或更低温度。当无法冷冻干燥时,最好的方法是分装成较小的样量存放,分批次取用,并尽快使用。其他:含 Met,Cys,Trp,Gln 或 Asn 的多肽容易降解,所以相对于其他不含此类氨基酸的多肽,其保存期较短,尤其是 N 末端为 Gln,建议尽快使用。二、多肽的溶解溶解肽是一个很重要的环节。如果溶解不当可能导致肽损失或者实验失败。肽的溶解性主要取决于肽的序列,所以,设计多肽时要加
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