- ¥256
- 联迈生物
- LM0031
- 中国/上海
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Baculovirus Shuttle Vector Bacmid Mini Preparation Kit
- 保质期：
室温保存，一年有效
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
室温保存
- 规格：
50次
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| LM0031 | 杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒 | 50次 | 256.00元 |
主要特点：简单快速，不使用剧毒试剂，无须酚氯仿抽提，无须过柱纯化，有效解决bacmid分子量大、抽提难度高等系列问题，确保抽提获得的bacmid可完美用于昆虫细胞转染。
当目的基因被插入到pFastBac系列载体中构建成目的重组质粒后，该重组质粒可用于转化大肠杆菌DH10Bac从而发生位点特异的转座(site-specific transposition)，蓝白斑筛选和PCR鉴定筛选含有重组bacmid的重组子，再使用本试剂盒进行bacmid的小量抽提即可获得可转染昆虫细胞的bacmid DNA。
本试剂盒在抽提bacmid的同时，也会抽提辅助质粒(helper plasmid)和未重组的pFastBac质粒。抽提获得的bacmid等质粒混合物可以直接用于转染昆虫细胞以包装杆状病毒，最终用于目的蛋白在昆虫细胞中的大量表达。
Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分：(1)用于插入目的基因的pFastBac载体，目的基因插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter)调控表达；(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid，用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座，从而形成重组的bacmid。
利用Bac-to-Bac杆状病毒感染昆虫细胞产生重组蛋白主要包括以下实验步骤：(1)把目的基因克隆到pFastBac载体产生重组质粒；(2)转化pFastBac重组质粒到DH10Bac大肠杆菌感受态细胞产生重组bacmid；(3)利用杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒提取重组bacmid DNA；(4)将重组bacmid DNA转染进入昆虫细胞(推荐使用联迈生物的LM0551 LipoInsect™转染试剂)以产生重组杆状病毒；(5)扩增重组的杆状病毒并用其感染昆虫细胞以大规模表达重组目的蛋白。
本试剂盒抽提获得的高质量bacmid DNA可以直接用于转染昆虫细胞，联迈生物生产的LipoInsect™转染试剂(LM0551)适用于将pFastBac等杆状病毒表达载体制备的bacmid转染到Sf9、Sf21和High Five™等昆虫细胞以用于Bac-to-Bac®、BaculoDirect™和InsectSelect™表达系统的蛋白表达。LipoInsect™转染试剂的转染效率非常高，对昆虫细胞Sf9的实测阳性率可达98%以上。
关于昆虫细胞系统的蛋白表达与纯化的详细介绍，请见如下网页： http://www.beyotime.com/support/insect cell.htm。
一个包装的本产品可以进行50次bacmid的小量抽提。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| LM0031-1 | 溶液I (悬浮液) | 15ml |
| LM0031-2 | 溶液II (裂解液) | 15ml |
| LM0031-3 | 溶液III (中和纯化液) | 15ml |
| LM0031-4 | RNase A (100mg/ml) | 15μl |
| LM0031-5 | TE | 1ml |
| － | 说明书 | 1份 |
室温保存，一年有效。
注意事项：
第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加入到溶液I (悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后须4℃存放。
温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。
溶液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。
溶液II使用完后，请注意盖紧瓶盖，以避免被空气中二氧化碳酸化。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行，但在4℃进行离心也是可以的。
溶液II有强碱性，溶液II和溶液III对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验包括柱离心式DNA胶回收及PCR产物快速纯化试剂盒、柱离心式质粒小量快速抽提试剂盒、柱离心式高纯质粒小量快速抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒小量快速抽提试剂盒、 质粒抽提、DNA胶回收、PCR产物纯化柱离心式多用途小量纯化试剂盒、柱离心式质粒中量抽提试剂盒 、柱离心式高纯度质粒中量抽提试剂盒、 柱离心式去内毒素超纯质粒中量抽提试剂盒 、核酸纯化小柱（质粒小抽、胶回收）、核酸纯化大柱（质粒中抽、大抽）等10个产品。 现因公司产品结构调整，转让该系列试剂盒的配方、生产工艺、生产设备。包教
【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？
不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。 我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大家讨论一下。 下面是我的实验过程，请高手指教，同时希望也给新手一个指导
空斑实验纯化病毒。 （3）Bacmid 后来Luckow等又发明了一种新的杆状病毒重组技术。他们根据 F因子载体原理，用类似于酵母体内重组的方法，构建了一种新杆状病毒穿梭载体Bacmid。该载体可像质粒一样在大肠杆菌中生长，又对鳞翅目昆虫细胞具有感染性。Bacmid含有F因子复制子(可在大肠杆菌中复制)、卡那霉素抗性基因及Tn7转座位点attTn7。转移载体中，外源基因置于杆状病毒启动子之下，两端分别为Tn7的左右端。以其转化含Bacmid的E coli菌株，由辅助质粒提供反式作用发生转座
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