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北京碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌
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Alkaline Phosphatase, from E. Coli
一年
北京百奥莱博科技有限公司
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌)现货价格,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌)现货价格规格:1000U产地:国产|进口品牌:百奥莱博编号:SY0389本品为大肠杆菌来源的碱性磷酸酶,浓度为5000U/ml。Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团,因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于蛋白的脱磷酸作用等。来源:携带Alteromonas undina P2碱性磷酸酶表达基因的大肠杆菌质量控制(Quality Control):无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染热灭活(Thermal Inactivation):65℃灭活20min储存液条件(Storage conditions):20 mM Tris-HCl (pH 7.6), 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.最佳温度(Optimal Temperature):25℃活性定义:在25℃条件下,30min内将1ug HindIII线性化pUC19 DNA进行脱磷酸化作用所用的酶量定义为1个活力单位*。优化体系(Optimal Buffer):AP Buffer (10 mM Tris-HCl (pH 8.5 at 25℃); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT.)【注】:“*” 去磷酸化定义为自连接体系中95%以上的线性DNA的环化作用被抑制。储存条件:-20℃,有效期一年。想要了解更多关于北京碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌)现货价格的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:·1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)编号:SY0321英文名称:1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibitors规格:100ml本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液(1×),裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。注意事项1)本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂,使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。2)裂解样品的所有步骤均需在冰上或4℃进行。3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明:(一) 培养细胞样品:1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂,使PMSF的最终浓度为1mM。【注】:请根据实验情况选用酶抑制剂。2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。(二)组织样品:1)把组织剪切成细小的碎片。2)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂,使PMSF的最终浓度为1mM。【注】:请根据实验情况选用酶抑制剂。3)按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。【注】:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。北京碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌)现货价格关键词:Alkaline Phosphatase, from E. Coli,SY0389,碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌)羟胺溶液(1.5mol/L,pH8.0) 100mlM0110 TMB-2HCL BL1258 MarkerⅡDNA LadderB1201 大牛血清(辐照灭菌)F030639 FITC标记山羊抗人IgG Fab抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG Fab*FITCCYB163037 羊抗小鼠IgG(全分子)-FITCMayer苏木素染色液 100ml|500mlARB13607 兔子肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)代做ELISA实验 Rabbit tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,traIL-r3 ELISA KITBFD044 伏马毒素快速检测试剂盒A0201 特级新生牛血清(无菌采制) 100ml/200ml/500ml*化银 PMP 7785-23-1Griess试剂 10gARB13461 鸡血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa方法检测 Chicken vascular endothelial cell growth factor,vegf ELISA KIT谷*酰胺转移酶 Potassium acetate 80146-85-6北京碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌)现货价格关键词:Alkaline Phosphatase, from E. Coli,SY0389,碱性磷酸酶(来源自大肠杆菌)·5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液编号:SY0349规格:2ml本品用于常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer),是一种经过改良的以*酚蓝为染料,5倍浓缩的蛋白上样缓冲液。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS还可以断开分子内和分子间的*键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构,DTT可以断开半胱*酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的空间结构,消除了蛋白结构之间的差异。因此,电泳速度只是与其分子量大小有关。*酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。注意事项1) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。2) 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液中含少量DTT,有轻微刺激性气味,但不含剧毒的巯基乙醇。3)5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液必须完全溶解后再使用。操作方法1. 在室温或不超过37℃的水浴中溶解5×SDS-PAGE上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。2.按照每4 μl蛋白样品加入1 μl 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的比例,混合蛋白样品和5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。3.100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。4.冷却到室温后,直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。5.通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。储存条件:-20℃,有效期一年。·Hoechst 33342/PI双染试剂盒编号:SY0500英文名称:Hoechst 33342/PI Double Stain Kit规格:100THoechst 33342/PI 双染试剂盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是:细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜,嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞,其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强,从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞,荧光强度比正常细胞要高。另外,细胞发生凋亡时染色质会固缩,从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA,并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加,这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞,即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性在早期即已丧失,可被PI染色。经上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光+弱蓝色荧光。本试剂盒染色快速方便,可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时,无需稀释等配制过程,也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品,每个样品的细胞数量可达105-106个。注意事项1) Hoechst 33342、PI对人体有害,请注意适当防护;2) Hoechst 33342、PI需避光,整个实验过程尽量避光操作;3) 荧光染料均存在淬灭情况,建议染色后需尽快检测;4) Hoechst 33342 与细胞孵育时间不宜过长,一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移,导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。5) 如果用于组织样品检测,则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。储存条件:-20℃,有效期12个月
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