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366
- 英文名:
Immnol Staining (Non-fluenrence) Secondary Antibody Dilution Buffer
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括YT091型免疫染色(非荧光)二抗稀释液特价促销在内的一系列细胞生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:YT091型免疫染色(非荧光)二抗稀释液特价促销
英文名:Immnol Staining (Non-fluenrence) Secondary Antibody Dilution Buffer
编号:YT091
规格:100ml
品牌:百奥莱博
本品可以用于非荧光免疫染色时二抗(secondary antibody)的稀释。经本免疫染色(非荧光)二抗稀释液稀释的二抗可以在1-2周内重复使用3-5次。
按照每个二抗稀释10毫升计算,一个包装的免疫染色(非荧光)二抗稀释液可以稀释10个或10次二抗。
注意事项:本免疫染色(非荧光)二抗稀释液经过滤除菌处理,使用过程中应尽量避免细菌污染。一旦启用后建议在一个月内用完,如果发现有沉淀或细菌污染请弃用。
储存条件:4℃,有效期一年。
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·磷酸化NF-κB p65(Ser536)抗体
编号:YT828
英文名称:anti-Phospho-NF-κB p65(Ser536) antibody
规格:>20次
本抗体是用人工合成的含磷酸化Ser536的一段人NF-κB p65多肽作为抗原制备而成的抗Phospho-NF-κB p65(Ser536)兔单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测,至少可以检测20次。
本Phospho-NF-κB p65(Ser536)抗体识别Ser536被磷酸化的NF-κB p65,可以检测内源性的Phospho-NF-κB
p65(Ser536),不识别其它位点磷酸化的p65,不识别p50亚基或其它相关蛋白。
NF-κB(nuclear factor κ-light-chain-enhancer of activated B cells)是一种常见的转录因子,可以被炎症因子、生长因子或趋化因子等激活。常见的炎症因子(包括Interleukin-1β、TNF-α和LPS等)都可以激活NF-κB。NF-κB由两类亚基形成同源或异源二聚体。一类亚基包括p65(也称RelA)、RelB和C-Rel;另一类亚基包括p50和p52。最常见的NF-κB亚基组成形式为p65/p50或p65/p65。
NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物,分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下,IκB kinase(IKK)复合物会被NF-κB-inducing kinase磷酸化激活,导致IκB-α会在Ser32和Ser36位点被磷酸化,随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后,其核定位序列暴露,从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。在一些可以激活NF-κB的刺激存在的情况下,一方面IκB-α被IKK磷酸化修饰导致其后续的泛素化降解,另一方面p65转录激活结构域的Ser536也可以被IKK磷酸化修饰,增强其转录活性。
产品组份:
Phospho-NF-κB p65(Ser536)抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml
抗体参数:
免疫原物种:人
免疫原:含磷酸化Ser536的一段人NF-κB p65多肽
克隆性:单克隆
宿主:兔
用途:WB,IP,IF,F
交叉反应性:人,小鼠,大鼠
同种型:IgG
NF-κB p65分子量:~65kD
推荐稀释比例:WB(1:1000),IP(1:50),IF(1:100),FCM(1:200)
注意事项:
1. 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
3. 对于本抗体,Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜,如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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·Western一抗二抗清除剂(弱碱性)
编号:YT072
英文名称:Antibody Stripping buffer(Weakly alkaline)
规格:250ml
本品用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为参照,或检测其它蛋白进行比较。通过使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
使用Western一抗二抗去除液多次重复使用同一张膜,会导致蛋白信号的减弱。但是,本Western一抗二抗去除液,经过多个抗体的检测试验,通常可以重复利用膜3-5次。使用本试剂只需大约20-30分钟即可实现蛋白膜的重复使用,然后可以进行封闭等后续的Western操作。
百奥莱博的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除结合的一抗二抗的原理方面略有不同。分别依靠去垢剂、酸性、碱性、还原剂、螯合剂、盐浓度以及一些特殊试剂等的不同组合来解除一抗二抗的结合,同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失。
抗体清除剂选型表:
| 产品编号 | YT071 | YT072 | YT073 | YT074 |
| 产品名称 | Western一抗二抗清除剂(强碱性) | Western一抗二抗清除剂(弱碱性) | Western一抗二抗清除剂(中性) | Western一抗二抗清除剂(酸性) |
| 产品包装 | 250ml | 250ml | 250ml | 250ml |
| pH | 强碱性 | 弱碱性 | 中性 | 酸性 |
| 对于膜上蛋白的保留效果 | 好 | 好 | 好 | 好 |
| 对于一抗二抗的去除效果 | 好 | 好 | 好 | 好 |
| 去除一抗二抗所需时间 | 15-20分钟 | 20-30分钟 | 20-30分钟 | 40-80分钟 |
| 适用膜的类型 | PVDF和NC | PVDF和NC | 仅PVDF | PVDF和NC |
| 腐蚀性 | 强 | 弱 | 无 | 弱 |
用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜,即硝酸纤维素膜时,不宜选用YT071N。从时间角度考虑,强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短,可以优先考虑。从价格因素考虑,强碱性的去除液性价比最高。从安全性考虑,中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作,并进行适当防护,使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。
对于特定的抗原和抗体,很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果最好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时,可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间,同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液,以摸索出最佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。
注意事项:
1. 使用辣根过氧化物酶(HRP),任何一次封闭(blocking)都应当使用5%脱脂牛奶,如果使用碱性磷酸酯酶,任何一次封闭都应当使用酪蛋白(casein)。
2. 为取得最佳效果,推荐使用PVDF膜。但硝酸纤维素膜也可以使用本Western一抗二抗去除液。
3. 使用化学发光试剂进行的Western检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western检测, 例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。
4. 本Western一抗二抗去除液有轻微腐蚀性,使用时请注意防护。
储存条件:4℃,有效期一年。
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