cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)哪里卖

cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)哪里卖

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  • ¥120 - 2300
  • 百奥莱博
  • BTN60906-NHV
  • 北京
  • 2025年07月16日
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      978

    • 英文名

      1st-Strand cDNA Synthesis Kit

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    • 保存条件

      2~8℃

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    百奥莱博专业生产供应cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)哪里卖,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。


    名称:cDNA第一链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)哪里卖
    产地:国产|进口
    编号:BTN60906
    规格:50次
    英文名:1st-Strand cDNA Synthesis Kit
    本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。

    产品特点:
    1. 使用突变的反转录酶,内源RNase H活性低。
    2. 最长可合成13Kb的cDNA。
    3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
    4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
    5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

    试剂盒组成:

     
    成分 规格
    MMLV(含RI) 100μl
    RT Buffer(含dNTP) 300μl
    Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL) 50μl
    Random Primer(0.2μg/μL) 50μl
    RNase-free水 1ml
    说明书 1份


    储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

    使用方法:

    一:合成PCR用的1st-strand cDNA
    1. 按下表配制RT反应体系:
    RNA 模板  
    总RNA 100-500ng
    或poly(A)mRNA 10-500ng
    或专一的RNA 0.01pg-500ng
    注意:RNA样品不能含有基因组DNA污染。

    引物
    Oligo(dT)18(0.5μg/μL) 1μl
    或随机引物(0.2μg/μL) 1μl
    或RNA 模板专一性引物 15-20 pmol
    注意:随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
    RNase-free水 补水到13μL

    2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
    3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
    4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则改成25℃ 5分钟。
    5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
    6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
    7. 70℃保温10分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用,不需要纯化。

    二:合成建文库用的1st-strand cDNA
    1. 按下表配制RT反应体系:
    RNA模板  
    poly(A)mRNA 1μg
    或专一的RNA 0.5-1μg
    注意:RNA样品不能含有基因组DNA污染。
    引物  
    Oligo(dT)18(0.5μg/μL) 1μl
    或随机引物(0.2μg/μL) 1μl
    或RNA模板专一性引物 100 pmol
    注意:随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
    RNase-free水 补水到13μL

    2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
    3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
    4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则改成25℃ 5分钟)。
    5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
    6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
    7. 70℃保温10分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

    三:用对照模板合成cDNA(需要用同位素,需要对照的客户需要单独跟我司联*(代"系"))
    1. 按下表配制RT反应体系:
    对照RNA模板(0.5μg/μL) 2μl
    引物
     
    Oligo(dT)18(0.5μg/μL) 1μl
    或随机引物(0.2μg/μL) 1μl
    或对照专用引物 2μl
    RNase-free水 补水到13μl

    2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
    3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP,本试剂不提供)。
    4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是25℃。
    5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
    6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。
    7. 加1μL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
    8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上,电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。

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