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- 文献和实验
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- 库存:
444
- 英文名:
Biotin-Protein A
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输,-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
生物素化的蛋白A厂家现货是高品质的蛋白质研究产品,由北京百奥莱博供应,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多生物素化的蛋白A等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:生物素化的蛋白A厂家现货
英文名:Biotin-Protein A
品牌:百奥莱博
规格:1mg
编号:BTN131099
本产品为生物素标记的蛋白A,可用于生物素化二抗的替代物。可以检测或定位位于细胞表面或组织中免疫球蛋白。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
关于生物素化的蛋白A厂家现货的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
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生物素化的蛋白A厂家现货关键词:BTN131099,Biotin-Protein A,生物素化的蛋白A
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生物素化的蛋白A厂家现货关键词:BTN131099,Biotin-Protein A,生物素化的蛋白A
·无缝克隆试剂盒
编号:BTN160680
英文名称:Seamless Cloning and Assembly Kit
规格:25次
无缝克隆是一种简单、快速、高效的DNA 定向克隆技术,该技术突破传统,不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制,利用同源重组的原理,可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短,阳性率达95%以上。
产品特点:
1. 简单、高效地定向克隆DNA片段。
2.可同时定向克隆两个或多个DNA片段。
3. 不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制。
4. 省时,反应时间加转化时间短至20分钟。
5. PCR产物(仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体)可直接进行重组反应,无需纯化。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×Seamless Mix | 125μl |
| 阳性对照DNA片段I | 10μl |
| 阳性对照DNA片段II | 10μl |
| 阳性对照线性化载体 | 10μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 线性化载体的制备:
可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。(如果线性化不彻底,将会导致阴性克隆的产生,推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。)
2. DNA片段的制备:
1)DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备,PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。
2)PCR扩增法引物设计原则:
A.引物的3´端必须包含18-50个能与模板DNA 结合的碱基序列,以便PCR扩增出目的DNA片段。
B.引物的5´端必须包含15-80个与线性化载体末端同源的碱基序列,以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。
3. 重组反应:
1)按照如下体系操作:
2)50℃反应15分钟,然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验,请将连接产物放-20℃保存。
注:线性化载体建议使用20-60 ng,DNA片段按照与线性化载体摩尔比3:1使用。
4.转化:
1)取5μl连接液至50-100μl 刚刚融化的感受态细胞中,轻轻混匀,冰浴2-30分钟。
2)42℃水浴热激30秒。
3)立即放置于冰上静置2分钟。
4)加入300-500μl 无菌SOC或LB培养基(不含抗生素),37℃,200-250rpm 振荡培养60分钟。
5)吸取 200μl菌液涂板,为得到更多克隆,可先3000 g离心2分钟,弃掉部分上清,用移液器轻吹菌体,至充分悬浮,取全部菌液涂板,然后37℃培养过夜(12-16小时)。
5. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
6. 阳性对照反应(可选)
将本试剂盒提供的阳性对照DNA片段和线性化载体按如下体系操作:
阳性对照DNA片段I(600bp,20 ng/μL)
或阳性对照DNA片段I(900bp,30ng/μL)
| 1μl | |
| 阳性对照线性化载体(2.8kb,30ng/μL) | 1μl |
| 2×Seamless Mix | 5μl |
| 超纯水 | 3μl |
50℃反应15分钟,然后按照步骤4转化涂板后用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定阳性重组子。
北京百莱博科技有限公司专业生产蛋白质研究产品,欢迎来电咨询选购生物素化的蛋白A厂家现货。
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文献和实验洗脱液,接着按照3.2b进行)2a.加入2ulRNaseA(0.5mg/ml).加热至65°C摇晃4-5小时或者过夜以逆转交联。DNA采用PCR纯化试剂盒中厂家说明进行纯化。样品冻存于-20°C.样品之所以加入RnaseA是因为高浓度RNA会在使用PCR纯化试剂盒时干扰DNA的纯化。而纯化柱子的饱和度是既定的。2b.加入5ul蛋白酶K(20mg/ml).加热至65°C摇晃4-5小时或者过夜以逆转交联。采用酚/氯仿抽提的DNA使用乙醇沉淀于10ul的糖原(5mg/ml).中。100ul水重悬浮。样品
分子,再用电泳来表明实验结果。免疫-PCR的关键之处就在于用一个连接分子将一段特定的DNA连接到抗体上,在抗原和DNA之间建立相对应关系,从而将对蛋白质的检测转变为对核酸的检测。最初Sano等人建立的免疫-PCR实验流程如下:(1)再包被缓冲液稀释抗原BSSA,并固定在微滴定板上。(2)微滴定板上加入相应的已稀释的单克隆抗体,并洗去未结合的抗体分子。(3)加入稀释的已与生物素化PUC19的结合的链亲和素-蛋白A嵌合体(蛋白A能与抗体结合,而链亲和素可与生物素化PUC19中的生物素结合),并洗去未
主要程序(1) 抗原+生物素化抗体→抗原-生物素化抗体复合物;(2) 加亲合素→抗原-生物素化抗体-亲合素复合物;(3) 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗体-亲合素-生物素化DNA;(4) PCR扩增生物素化DNA部分。实验步骤(1)制备生物素化DNA将噬粒 BLuescript skt,用生物素标记的M13引物进行PCR扩增制备出含T3和T7引物序列的280bp DNa段,即为生物素化DNA。(2)免疫PCR模式1. 试剂包被缓冲液:20mmol/L Tris-HCI(pH9.5),含
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