蓝色DNA上样液(6×,非甘油) 核酸电泳和回收

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")蓝色DNA上样液(6×,非甘油) 核酸电泳和回收，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：蓝色DNA上样液(6×,非甘油) 核酸电泳和回收
规格：10mL
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN130958B

我公司的蓝色DNA上样液(6×,非甘油) 核酸电泳和回收，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
5-核黄素磷酸*盐 Aluminium hydroxide 130-40-5
BTN130895 YPD液体培养基 YPD Liquid Medium
ARB13516 鱼类主要组织相容性复合体(MHC)免费代测 Fish mhc ELISA KIT
ARB13202 小鼠胶原酶Ⅱ(CollAgenAse Ⅱ)代做ELISA实验 Mouse collagenase type Ⅱ ELISA KIT
BL0763 RQ1 Rnase-Free Dnase
ARB14025 植物血凝素(PHA)血清中含量检测 phytohaemagglutinin,pha ELISA KIT
ARB10902 人抗链球菌溶血素O/抗O(ASO)代做ELISA实验 Human anti-streptolysin o,aso ELISA KIT
BTN70907 去离子甲酰胺 Deionized Formamide
PY02-077  疱肉培养基基础  250克  
BL1362 酵母破壁酶溶液
ARB12732 小鼠6酮前列腺素F1A(6-keto-PGF1A)酶标法分析 Mouse 6-keto-prostaglandin f1a,6-k-pgf1a ELISA KIT
ARB11061 人转化生长因子β1(TGF-β1)Elisa分析 Human transforming growth factor β1,tgf-β1 ELISA KIT
蓝色DNA上样液(6×,非甘油) 核酸电泳和回收关键词：BTN130958B,蓝色DNA上样液(6×,非甘油),DNA Loading Buffer(Blue)


·IPTG溶液
编号：BTN80909
规格：1.5mL

·Southern封堵液(NC专用)
编号：BTN120676
英文名称：Southern Blocking Buffer (NC)
规格：100mL
本产品为专门针对NC膜的核酸杂交封堵液，用于降低检测时的非特异性信号，降低背景，增强信噪比。经过反复优化配方，即开即用，方便快捷。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

·强RIPA裂解液
编号：BTN131006
英文名称：RIPA Lysis Buffer(Strong)
规格：250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表：

 

产品名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
细胞核转录因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制剂	是	是	是
含磷酸酯酶抑制剂	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

备注：
1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。


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·柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130970
英文名称：Gram positive bacteria RNA Column extraction kit
规格：50次

·超快DNA-RNA两用转膜试剂盒
编号：BTN121110
英文名称：Rapid Nucleic Acid Blotting Kit
规格：5次
本试剂盒是基于毛细管转膜法的Southern和Northern印迹膜制备试剂，专门用于从电泳得到的凝胶中制备用于Southern杂交和Northern杂交的印迹膜。其操作流程如下：


产品特点：
1.即开即用，提供制备5张13×20cm大小的Southern杂交和Northern杂交印迹膜所需要的印迹膜和溶液，不需要用户单独准备。
2.快速：转膜过程只需要1小时，整个过程只需要2.5小时(对DNA)或1.5小时(对RNA)。
3.跟硝酸纤维素膜、带电尼龙膜、中性尼龙膜和PVDF膜兼容。包括Nytron、Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon等。
4.A型提供硝酸纤维素膜，适用于400bp以上的靶分子，背景低。B型提供带电尼龙膜，适用于40bp以上的靶分子，结合力强。如需中性尼龙膜或PVDF膜，需另购。
5.使用优化的下向转膜法，不但效率比上行转膜法高30%左右，而且条带弥散度低、分辨率高。
可用琼脂糖胶(包括脉冲电泳胶，DNA电泳、RNA甲醛胶电泳和RNA戊二醛电泳)和DNA PAGE胶。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	660g
溶液B	100ml
溶液C	250ml
硝酸纤维素膜13×20cm	5张(仅A型提供)
带电尼龙膜13×20cm	5张(仅B型提供)
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：

一：Southern印迹膜的制备
1.按常规方法进行电泳(包括脉冲电泳)，本试剂盒不提供电泳所需试剂。如果进行常规的Southern杂交，建议使用0.7%琼脂糖进行电泳，分离酶切的基因组DNA。电泳时最好加电泳分子量对照、酶切对照(先将标记的全长lambda DNA或探针质粒与样品DNA的混合，再酶切)、阴性样品(不含检测片段的DNA样品)、杂交分子量对照(标记的1.lambda/Hind III)等。电泳后和荧光标尺并排拍照。
2.变性：首次使用时需配制变性液2.5L(在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，搅拌缓慢中加入220g成分A和100mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用)，将凝胶转移到一个至少10倍于胶体积的变性液中，脱色摇床上室温下摇晃处理60分钟(如果使用带正电尼龙膜，此步处理可以缩短到30分钟)。未用完的变性液可放瓶中室温保存。
3.转膜：如果使用带正点的尼龙膜，则直接用上步配制的变性液转膜，如果使用中性尼龙膜和硝酸纤维素膜，则需配置转膜液(在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，缓慢搅拌中加入440 g成分A和2mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用)。将凝胶转移到至少10倍于凝胶体积的转膜液中，脱色摇床上室温下摇晃处理15分钟。
4.测量凝胶的大小，然后借助尺子准确切出一张印迹膜，每边比凝胶大1mm，并切去一角，将印迹膜漂浮于去离子水上20分钟确保全部湿润，再按下图设置下行转膜体系(比上行转膜体系效率高30%)。图中membrane即印迹膜，transfer buffer即转膜液，吸水滤纸厚度为2-3cm，一般按每cm2印迹膜需要1mL转膜液的比例准备转膜液。对大的凝胶，可以同时使用两张滤纸分别跟两个容器的转膜液连接以便使转膜匀浆。

5.转膜1小时。结束后用铅笔标记核酸结合面以免搞错。注意：不要过夜转膜，否则信号将降低50%。
6.将印迹膜在中和液中处理10分钟，中和液的用量至少为0.5mL/cm2印迹膜。
7.可将凝胶放入EB(0.5μg/mL)溶液中染色30分钟后UV下观察残留核酸的量，反推转膜效率。此步也可跳过。
8.将印迹膜夹在两层滤纸中间80℃干燥15分钟以固定核酸(不需真空)，干燥时间不需延长，否则杂交信号可能会降低。
9.此时印迹膜可直接用于后续的核酸杂交实验或者在干燥状态下保存待用(可放数月)。

二：Northern印迹膜的制备
10.按常规方法进行电泳，本试剂盒不提供电泳所需试剂。本方法适用于甲醛变性胶和乙二醛变性胶，电泳后和荧光标尺并排拍照。
凝胶不需要变性和中和处理(也不能变性，否则RNA将会降解)，直接进入转膜步骤(同Southern印迹膜制备的第3到第9步)。

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