核酸内切酶IV价格

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百奥莱博专业生产销*(代"售")核酸内切酶IV价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：核酸内切酶IV价格
品牌：百奥莱博
规格：1000U
产地：国产|进口
编号：BTN130638
英文名：Endonuclease IV
核酸内切酶IV能够作用于DNA分子上的几种氧化性损伤。该酶是一个脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶，水解DNA上的完整AP位点，占E.coli AP酶总活性的10%。切割AP位点5´端的第一个磷酸二酯键，产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有3´二酯酶活性，能从DNA的3´末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´-磷酸和磷酸。其反应原理图如下：


产品用途：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10⁴～1:10⁵；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋。

产品组成：

 

成分	规格
Endonuclease IV	100μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

热失活：85℃，20分钟。

活性定义：1单位指在 10μl缓冲液体系中，37℃条件下，1小时内能够切割 1pmol含一个AP位点的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理 10pmol含单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。

除核酸内切酶IV价格外，我公司正在打折促销以下产品：

·PMSF溶液(10mg/mL)
编号：BTN100833
英文名称：PMSF Solution
规格：5mL
本产品为溶于异丙醇中的浓度为10mg/mL的PMSF溶液，其工作浓度为17-174μg/mL(0.1-1.0mmol/L)。PMSF在水液体溶液中不稳定，半衰期为110分钟(pH7.0)或35分钟(pH8.0)，所以在每一步骤中都必须新鲜加入本产品。本产品作用是抑制丝*酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：临用前室温融解本产品，混匀，按照合适比例加入到组织细胞裂解液中，一般建议工作浓度为0.1-1.0mmol/L。

注意事项：
1．PMSF 剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。
2．PMSF在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加入裂解液中。

·5´RACE试剂盒
编号：BTN101105
英文名称：5´-RACE Kit
规格：10次
研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点，目前最通用的方法是5´-RACE法，RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是Frohman发明的、通过PCR快速克隆cDNA末端的技术，它在不建立cDNA文库的前提下，利用已知cDNA序列设计引物，通过往两端延伸和扩增获得其5´-端序列。本试剂盒就是根据5´-RACE原理而开发。RACE的原理如下图：


产品特点：
1. 即开即用，客户不需要单独准备各种材料。
2.反应条件经过精心优化，包括使用无RNase H活性的MMLV和优化的引物。

试剂盒组成：

成分	规格
MMLV逆转录酶-RI混合液(RNase H-，200U/μL)	10μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	60μl
微量核酸沉淀剂	400μl
TdT(末端转移酶)	10μl
2×TdT Buffer(含dATP)	100μl
PCR MagicMix 3.0	1.5ml
5´-RACE引物A-引物B混合液	100μl
5´-RACE引物C	100μl
RNase-Free水	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

1.变性模板RNA：将1μg mRNA或5μg总RNA加入到一个RNase-free的PCR管中，补RNase-Free水到9μL，65℃保温5分钟后短暂离心，立即放冰上待用。如果RNA浓度偏低，体积超过9μl,可以使用本公司的核酸浓缩剂(需另购,产品编号为BTN110801)浓缩到所需的体积。
2. 设置RT反应(用户可以根据需要设阴性对照)：在上步的含变性后的RNA模板的PCR管中，按顺序加入：

成分	用量
自备的基因专一性引物A(10μM)	4μl
MMLV Buffer-dNTP混合液	6μl
MMLV逆转录酶-RI混合液	1μl
合计	20μl

3. 37℃保温60分钟，42℃保温30分钟，50℃保温10分钟，最后75℃保温10分钟使逆转录酶变性。
4. 短暂离心5秒后待用。
5.在PCR管中加入40μl微量核酸沉淀剂(本产品含不溶的核酸助沉剂，用前需要充分摇匀再取用)，震荡混匀。
6.室温12000rpm离心15分钟，小心吸弃上清。
7. 加入1mL自备75%乙醇，室温12000rpm离心5分钟，小心吸弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体后，稍微晾干后加入10μL RNase-free水，充分吹打溶解，得到cDNA溶液。注意：为保证加尾效率，溶解cDNA的RNase-free水最好不要超过10μl。
9. 加尾反应：在10μL cDNA溶液中加10μL 2×TdT Buffer(含dATP)和1μL TdT酶，轻柔吹打混匀。
10. 37℃保温15分钟进行加尾反应，然后75℃保温3分钟灭活末端转移酶。
11. 加入0.5mL RNase-free水稀释加尾反应体系。此稀释液将作为PCR的模板。
12. 第一轮PCR：用不同量的稀释后的加尾反应液设置PCR反应(样品组最好设用量梯度，单位：μL)。

成分	梯度1	梯度2	梯度3	梯度4
PCR MagicMix 3.0	25	25	25	25
自备基因专一性引物B(10μM)	2.5	2.5	2.5	2.5
5´RACE引物 A-引物B混合液	2.5	2.5	2.5	2.5
稀释后的加尾反应液	1	5	10	15
RNase-free 水	19	15	10	5
合计	50	50	50	50

13. 按下列条件进行 PCR(注：应根据实际情况选择适当的退火温度)。
 第1次循环：94℃ 5分，48-52℃ 2分，72℃ 4分
 第2-30次循环：94℃ 40秒，52-60℃ 1分，72℃ 3分
 最后延伸：72℃ 15分
14. 取10-20μL PCR产物进行琼脂糖电泳电泳检查PCR结果，如果一条清晰的条带，则可以不做后续的第二轮PCR，而直接进行 DNA 测序或TA克隆。
15. 第二轮PCR：如果第一轮PCR没有一条清晰的条，则带从4管PCR产物中各取1μL分别加入到20μL RNase-free水中进行稀释，然后各取1μL分别作为4管第二轮PCR的模板：

成分	用量
第一轮 PCR产物的稀释液	1μl
PCR MagicMix 3.0	25μl
5´RACE引物 C	2.5μl
自备基因专一性引物 C(10μm)	2.5μl
RNase-free 水	补水至50μl
合计	50μl

16. 按下列条件进行 PCR：第 1-30次循环(94℃ 40秒，52-60℃ 1 分，72℃ 3分)，最后延伸：72℃ 15分
17. 取10-20μL第二轮 PCR产物进行琼脂糖电泳，一般都会有一个样品有清晰的条带出现，则可以直接进行DNA测序或TA克隆。


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·B-5固定液
编号：BTN140587
英文名称：B-5 Fixative Solution
规格：250mL
B-5固定液为骨髓活检常规固定液，也常用于淋巴组织的固定。其主要成分为*化汞、醋酸*、甲醛等。固定时间2-4小时。经过固定的标本保留在10%福尔马林或70%乙醇中。 B-5固定液固定的组织切片含有汞沉淀在染色前必须进行脱汞处理。
注：固定过程中不要使用任何金属用具或金属类盖子。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

·6nt随机引物(抗水解)(0.5mM)
编号：BTN120679
英文名称：Exo-Resistant Random Primer
规格：100μL
本产品为具有外切酶抗性的随机引物，是单链随机寡核苷酸混合物，可高效、随机引发不同DNA的合成反应。本产品含有2个3´-末端硫代磷酸酯(PTO)修饰，对校正DNA聚合酶的3´至5´外切核酸酶有抗性。该引物还含有5´和3´-羟基末端。本产品浓度为500μm，可用于基因组DNA和质粒的链置换扩增以及随机引发的DNA标记。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

·一管式双链cDNA合成试剂盒
编号：BTN130308
英文名称：One-Tube double-stranded cDNA Synthesis Kit
规格：10次
本产品是用于一管式双链cDNA合成的试剂盒。cDNA第一链合成的原理是以OligodT为通用引物的、MMLV催化的逆转录反应。其原理如下：


cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其原理图如下：


产品特点：
1. 即开即用，含有合成两条cDNA链的所有试剂。
2.适用于含poly rA的RNA，对不含poly rA的RNA(如细菌RNA)，不能使用本试剂盒制备ds cDNA。
3.一管式进行，第一链cDNA合成后不需要任何处理，直接进入第二链的合成。
4. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
5. 本试剂盒足够10次80μL体系的双链cDNA合成反应。
6. 如果需要合成全长cDNA，最好选用SMART全长cDNA双链合成试剂盒。

试剂盒组成：

成分	规格
Oligo dT引物	10μl
cDNA第一链合成缓冲液	40μl
MMLV 逆转录酶(200U/μL)	10μl
5×cDNA 第二链合成缓冲液	160μl
20×cDNA 第二链合成酶混合液	40μl
T4 DNA聚合酶	20μl
0.2 M EDTA溶液	40μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：mRNA的制备
本试剂盒不提供mRNA提取试剂，用户需自备相关试剂。

二：双链cDNA的合成
1.在一个干净的塑料离心管中，按下表设置cDNA合成反应：

成分	用量
自备mRNA样品	4μl(0.5-2μg)
Oligo dT引物	1μL
70℃ 2分钟后室温放置2分钟，短暂离心
cDNA 第一链合成缓冲液	4μL
MMLV 逆转录酶	1μL
轻柔吹打混匀后42℃保温90分钟合成第一链cDNA
超纯水	48μL
cDNA 第二链合成缓冲液	16μL
cDNA 第二链合成酶混合液	4μL
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶	2μL
轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液	4μL

注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等实验。


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EDTA脱*液   500ml|5L
130-22-3 茜素红 Alizarin red
Fmoc-S-三*甲基-L-半胱*酸 2-Naphthol 103213-32-7

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