AEBSF溶液(10mg/mL) 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

AEBSF溶液(10mg/mL) 是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多AEBSF溶液(10mg/mL)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：AEBSF溶液(10mg/mL) 蛋白质研究
产地：国产|进口
编号：BTN130544
品牌：百奥莱博
规格：5mL
本产品为浓度是10mg/mL的AEBSF水溶液，工作浓度为0.1-1.0mg/mL。4-(2-*乙基)*磺酰*盐*(代"酸")盐(4-(2-Aminoethyl)benzenesulfonyl fluoride hydrochloride，Pefabloc SC)，分子量是239.5，溶于水，无毒，在低pH条件下，比PMSF更稳定。它是一种水溶性的不可逆的丝*酸蛋白酶，可以抑制胰凝乳蛋白酶，激肽释放酶，血纤维蛋白溶酶，凝血酶和胰蛋白酶。


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期3个月。

我公司的AEBSF溶液(10mg/mL) 蛋白质研究，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·可保种型蓝白T载体
编号：BTN60803
英文名称：Blue-White Vector T
规格：50 ng
本产品是环状的可以制备Clion蓝白T载体的质粒DNA。T载体是克隆PCR扩增产物的必不可少的工具，但是由于市场上的各种T载体质量参差不齐，用户很难购买到满意的产品；同时购买的T载体为线性DNA，不能保种，必须反复购买，累计成本很高。为解决这一问题，我司特推出可保种型T载体，用户只需要购买Xcm I内切酶就可以自己制备高质量的T载体，随用随配，十分方便。

产品特点：
1.一次购买，终身拥有。本产品提供制备T载体用的环形质粒DNA，可以象其他质粒一样保种并长期保存。
2. 随用随配，十分方便。用户只需要提供Xcm I 限制性内切酶和基本分子生物学实验条件，就可以自己制备T载体。整个过程只需要两天。
3. T载体含T 率为100%。本方法不是使用传统的加尾法，而是使用Xcm I酶切法。质粒的多克隆位点上预先插入了一段长为1.3 Kb的Xcm I DNA片段,经Xcm I酶切后回收得到的质粒DNA(T载体)两端自然全部带有T 突出，比例远远高于用Taq DNA聚合酶加尾法和TdT 加尾法得到的T载体。
4. 方便各种下游操作。用本产品得到的蓝白T载体插入位点两侧有多种常见的酶切位点，便于后续克隆； Xcm I 位点在Alpha 互补区，可以使用蓝白斑筛选重组子；两边还有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于制备RNA探针。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一.细菌的转化
1. 将100μl感受态细胞于冰上解冻。注意：最好使用end A1菌种(如DH1、DH5、DH5、JM109、XL1-Blue等。常用宿主细菌的基因型可以参考《分子克隆手册》等参考书)。因为这类细菌所含DNase少，制备T载体后，残留的DNase对的T末端的破坏机会更小。
2. 取5-10μl本产品加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2分钟。
4. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时。
5. 取100μl培养液涂布到含Amp的LB琼脂平板表面。
6. 将平板置于室温直至液体被吸收。
7. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。

二.细菌的鉴定
1. 挑取单个菌落进行过夜细菌培养。
2. 按常规的方法进行质粒小量制备。
3. 用Xcm I内切酶按下面条件酶切提取的质粒DNA，如果大规模酶切，需要按比例增加各成分用量:

 

成分	使用量
Xcm I Buffer,10×	5μl
质粒DNA	<或= 2μg
Xcm I	1μl
超纯水	加到50μl

 37℃保温一小时，65℃保温20分钟使酶失活。
4.电泳，本产品被Xcm I酶切后将产生3 Kb和1.3 Kb的两段DNA。
5. 如果Xcm I酶切图谱正确，则按常规的方法进行细菌的保种。

三. T载体的制备
1. 参考《分子克隆手册》等参考书培养细菌和提取质粒DNA。注意：一定要去尽可能去除残留的RNA和蛋白质(含残留DNase)的污染。
2. 用Xcm I酶切质粒。注意：酶切时间最好不要超过一小时，避免残留的DNase对T末端的破坏。
3.电泳后切下含3Kb DNA(既蓝白T载体)的胶段。注意：千万不要用UV照射将要回收的片段，因为UV会使DNA交连，使DNA失去转化细菌的能力。如果酶切的DNA量大，可以使用百奥莱博绿如蓝核酸染料,可以直接在可见光和黑背景下切胶。如果别无选择，最好在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免DNA交连，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)
4. 用常规DNA回收方法进行胶回收。
5. 测定T载体DNA的浓度后，将T载体DNA保存在-20℃备用或直接使用。

四.连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：

成分	样品管	阴性对照管
T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl
蓝白T载体	20-50ng	20-50ng
PCR 纯化产物	50-500ng	不加
T4 Ligase	3-5U	3-5U
补水到	10μl	10μl

注意: PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3:1-10:1。
3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的操作说明书进行连接)。

五.细菌转化和鉴定
1. 取5μl连接产物进行转化，具体步骤见本手册一，最好使用含X-gal、IPTG、Amp的LB琼脂平板以便进行蓝白筛选。
2. 按经典的质粒提取+酶切或测序鉴定，可以选用的、在插入位点两侧都有酶切位点的酶有BstZ I、EcoR I和Not I。可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。按菌落PCR方法筛选，可选用百奥莱博的菌落PCR试剂盒(BTN50901)进行快速筛选，需要T7和SP6 RNA聚合酶启动子引物。

MCS位点：



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·生物素化的蛋白G
编号：BTN131098
英文名称：Biotin-Protein G
规格：0.5mg
本产品为生物素标记的蛋白G，可用于生物素化二抗的替代物。可以检测或定位位于细胞表面或组织中免疫球蛋白。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·核酸清除剂
编号：BTN81216
英文名称：Nucleic Acid Scavenger
规格：1.5mL
本产品用于去除蛋白样品中的核酸污染。蛋白双向电泳的关键是制备好的样品，其中包括核酸的清除，因为核酸能与蛋白质结合，影响聚焦。同时，核酸的分子量大，容易堵塞凝胶，造成条带拖尾。此外，如果使用银染的方法检测蛋白质，污染的核酸也会被染色，为此我司开发了本产品。

产品特点：
1. 使用简单，加入样品中简单保温即可。
2. 效率高，10分钟内可以清除核酸(DNA和RNA)对蛋白质电泳的干扰。
3.基于酶学消化，所以会引入DNase和RNase。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在样品中加入0.1倍体积的本产品，轻柔混匀。
2.在冰上保温10-30分钟，使核酸降解成单核苷酸或寡核苷酸。

注意事项：
这两种酶也有可能在双向电泳图谱呈现蛋白斑点。用超离心方法也能除去核酸，但也可能除去大片分子质量的蛋白质，在低离子强度时，带负电的核酸和带正电的蛋白质会形成复合物，所以用高pH和高离子强度的溶液能减少这种反应，单最后还必需去盐。


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·EDTA溶液
编号：BTN131181
英文名称：EDTA Solution
规格：1mL
本产品是0.2M EDTA溶液，专用于终止各种需要*离子的酶反应。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·高pH缓冲液套装
编号：BTN100828
英文名称：High pH Buffer Set
规格：30次
本产品用于Native-PAGE(非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳)分离大多数蛋白质，这些蛋白在此条件下一般都向阳极移动。本产品的特点是即开即用，省去用户单独配置每种溶液的麻烦。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH6.7)	100ml
4×分离胶配胶液(pH8.9)	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
5×高pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×高pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

北京百莱博科技有限公司专业生产蛋白质研究产品，欢迎来电咨询选购AEBSF溶液(10mg/mL) 蛋白质研究。