非变性法蛋白沉淀试剂盒报价

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百奥莱博专业生产销*(代"售")非变性法蛋白沉淀试剂盒报价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：非变性法蛋白沉淀试剂盒报价
规格：10次
编号：BTN81029
产地：国产|进口
英文名：Non-Denaturing Protein Precipitation Kit
本产品是基于蛋白质盐析和透析原理开发的非变性蛋白质浓缩产品。其原理是将大量具有很强水化能力的硫*(代"酸")铵加到蛋白质溶液中，夺取蛋白质分子的水化层(尤其是蛋白质表面非极性区的水化层)，使之“失水”，于是蛋白质分子间的非极性基团将互相结合，使蛋白质形成沉淀，离心分离沉淀后，再用透析方法将蛋白质中的盐除去，即得浓缩的蛋白质。

产品特点：
1.适合于浓缩各种蛋白质粗提液，一次可以处理50mL蛋白质溶液。
2. 非变性法，不会破坏蛋白质的天然结构和活性，尤其是适用于对变性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白质结构稳定，适合于长期保存。
4.可以在透析是进行缓冲液的调换。
5.一站式，带有盐析和透析所需的物品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml×10
无菌水	50ml
EDTA溶液(0.5M)	0.5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：除对温度敏感的蛋白质样品需在4℃环境下(如冷室)操作外，一般可在室温中操作，操作者整个操作须戴好手套。

盐析沉淀
1．测量待浓缩蛋白质样品的体积，并将其转移到容积至少是样品体积两到三倍的无菌烧杯或玻璃三角瓶中。注意：需要处理的蛋白质样品最好溶解在pH为中性的缓冲液中(如50mM的Tris-HCl)，浓度最好在1mg/mL以上。
2．将一个无菌的磁力搅拌子放入三角瓶中，再将三角瓶放置在磁力搅拌器上，打开开关后缓慢搅拌。注意：搅拌过程中不能产生泡沫。
3．如果待浓缩蛋白容易被金属离子失活或抑制，则最好加入EDTA溶液，使其终浓度为10mM，否则此步可省略。
4．根据所需硫*(代"酸")铵的饱和度计算需要加入的溶液A的体积，溶液A的硫*(代"酸")铵饱和度是100%。一般50%的硫*(代"酸")铵饱和度就可以沉淀绝大部分蛋白，超过此饱和度溶液比重很大，难以通过离心收集蛋白质沉淀。
5．小心缓慢加入所需的溶液A(用前需要摇匀)。注意：最好每次少量加入，切莫一下倒入，否则蛋白质容易变性。混合过程中，蛋白质沉淀可能会使溶液呈牛奶状，属于正常现象。
6．将所需溶液A全部加入后，冰上放置60分钟或过夜让蛋白质充分沉淀。
 注意：血红蛋白、肌红蛋白和清蛋白等在较高的温度25℃比在0℃度时溶解度低，更容易盐析，所以浓缩这些样品时冰浴放置可以改为室温放置。有的蛋白质15-20分钟就可以完全沉淀，有的则需要数小时。
7．将溶液轻移到旋盖塑料离心管或离心瓶中，在平衡条件下15000×g 4℃离心15分钟。
 注意：溶液比重很大，一定要重量上平衡而非体积平衡。
8．小心弃上清，得到蛋白质沉淀。此沉淀可以在4℃放置数月。
9．将尽可能少的无菌水或其他缓冲液加入蛋白质沉淀中使之溶解，所加体积一般是沉淀物体积的1-2倍。如果沉淀溶解后非常粘稠，可以适当补加无菌水使其变得不粘稠。此沉淀可以在4℃放置几天。
10．如果溶液中有不溶物(主要是变性的蛋白质)，可以15000×g 4℃离心15分钟，留上清。
11．上清液可以用于SDS-PAGE电泳检测或UV法蛋白质浓度测定。
12．如果后续纯化方法是疏水层析或排阻层析，则不需要将溶液中残留的盐去掉，可以直接使用。如果后续纯化是离子交换层析，则需要将溶液中残留的盐去掉，一般采用透析法，具体操作见附一。

附一：透析脱盐
1．将蛋白溶液转移到一端已经封口的透析袋内，预留一些液体膨胀的空间，然后将另一端封口。注意：用户需要预处理透析袋，预处理的方法是将透析袋在含2%(W/V)碳酸**和1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟，用蒸馏水彻底清洗透析袋，然后放在1mM EDTA的溶液中煮沸10分钟并浸没在此溶液中冷却，最后放4℃保存待用。取用时必须要戴手套。
2．将透析袋放置在装有透析液的容器中，透析液的体积必须是蛋白质溶液的20-100倍，溶液最好处于搅拌状态。用户可以用适合后续实验的任何缓冲液作为透析液。每次透析3-4小时，共透析2-3次。可以用自备的*氏试剂检测透析袋外面溶液是否还有残留的铵离子来检测透析是否完成。
3．将透析后的溶液全部转移到离心管中，15000×g 4℃离心15分钟，上清液即为浓缩后的蛋白溶液。可以放-80℃冰箱保存或立即用于后续的实验。
4．如果需要快速测定蛋白质的浓度，可取少许样品作适当倍数稀释后，用紫外分光光计测280nm和260nm的光吸收，再计算其浓度，计算公式为：蛋白浓度(mg/mL)＝(1.45×OD280-0.74×OD260)×样品稀释度。

附二：多克隆抗体的浓缩
1．将待处理的血清样品在4℃或室温20000×g离心30分钟，收集上清。
2．取上清20mL与等体积的自备生理盐水混合后，于搅拌下缓慢滴加40mL溶液A。
 注：加等量生理盐水的目的是将蛋白质含量降低到2.5-3.0%，否则其他蛋白质会跟抗体一起共沉淀。
3．冰上放置30分钟以上或过夜，使蛋白质充分沉淀。
4．将溶液转移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
5．用12mL自备生理盐水溶解蛋白质沉淀。
6．于搅拌下缓慢滴加8mL溶液A，冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
7．将溶液转移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
8．用13.3mL 生理盐水溶解蛋白质沉淀。
9．于搅拌下缓慢滴加6.6mL溶液A，冰上放置1小时使蛋白充分沉淀。
10．将溶液轻移到旋盖塑料离心管中，15000×g 4℃离心10分钟，弃上清。
11．用少许生理盐水溶解蛋白质沉淀，并转移到透析袋中。
12．用大于20-100倍体积的PBS 于4℃对蛋白质溶液进行透析，更换透析液数次，然后让蛋白质溶液置-80℃保存或用其他方法进一步纯化。

非变性法蛋白沉淀试剂盒报价正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·Pfu DNA聚合酶
编号：BTN51207
英文名称：Pfu DNA Polymerase
规格：100U
Pfu DNA Polymerase是Pyrococcus furiosis(激烈火球菌)DNA Polymerase基因在大肠杆菌中表达并经多次过柱纯化分离而得。可用于高保真PCR、长链PCR的扩增，还可以用于DNA片段的粘转平反应。

产品特点：
1．它具有3´-5´聚合酶活性，跟常用的Taq DNA聚合酶一样，能够用于PCR反应。
2．与Taq DNA Polymerase不同的是，它还具有3´-5´外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。
3．其出错率最低的是具有校正功能的耐高温DNA Polymerase中最低的。
4．Pfu DNA聚合酶比普通Taq DNA聚合酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍维持90％以上活性。

产品组成：

成分	规格
Pfu DNA聚合酶(3U/μL)	100U
10×Pfu Buffer	0.1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存。

使用方法：(以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例)

1．按下列组份配制PCR反应液

Pfu DNA聚合酶(3U/μL)	0.5-1μL
10×Pfu Buffer	5μL
dNTP Mixture(各2.5mM)	4μL
模板DNA	见下
引物1(10 uM)	1μL
引物2(10 uM)	1μL
灭菌蒸馏水	Up to 50μL

推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
酵母基因组DNA	5-500ng
细菌基因组DNA	0.5-50ng
质粒DNA	5-500pg
PCR回收片段	1-100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

温度	时间	循环数
94℃	3min
94℃	30sec	30~50循环数
55℃	30sec
72℃	2min
72℃	5min

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

10×Pfu Buffer的组成：200mM Tris-HCl(pH8.8)，100mM KCl，100mM(NH₄)2SO₄，500mM MgSO₄

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位。

质控标准：
1．SDS-PAGE 考马市亮蓝染色无杂带污染。
2．无核酸内切酶活性检测(切刻酶活力)、核酸外切酶活性、核酸酶活性检测。


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·1M DTT溶液(RNase-Free)
编号：BTN60405
规格：10mL

·一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装
编号：BTN80810
英文名称：One-Stop SDS-PAGE Pack
规格：30次
SDS-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1．一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2．安全，将实验人员接触粉末状丙*(代"烯")酰胺的可能降到最低。
3．灵活，分开提供的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺便于配制各种比例和浓度的SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4．使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
5．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
分离胶缓冲液，4×	200ml
浓缩胶缓冲液，4×(含染料)	100ml
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g
SDS-PAGE上样液，5×	1套(1mL)
SDS-PAGE电泳液，1×(干粉)	1套(20L)
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输，分别在4℃和-20℃有效期一年。

自备试剂：去离子水。

使用方法：
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液，下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中(注意：甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在１月内用完。
3．根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表：

蛋白质大小范围(kD)	最佳浓缩胶浓度	最佳分离胶浓度
15-45	4%	15%
15-60	4%	12.5%
18-75	4%	10%
30-120	4%	7.5%
60-200	不需要	5%

注：如果上样体积少于10μL，可以不需要浓缩胶。
4．配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：称0.1克过APS干粉到1mL去离子水中，摇晃溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
5．配制分离胶：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙*(代"烯")酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量(单位：mL)
	水	30%AB溶液	4×分离胶配胶液
5%	5.83	1.67	2.50
6%	5.50	2.00	2.50
7%	5.17	2.33	2.50
7.5%	5.00	2.50	2.50
8%	4.83	2.67	2.50
9%	4.50	3.00	2.50
10%	4.17	3.33	2.50
11%	3.83	3.67	2.50
12%	3.50	4.00	2.50
13%	3.17	4.33	2.50
14%	2.83	4.67	2.50
15%	2.50	5.00	2.50
16%	2.17	5.33	2.50

6．配制浓缩胶(一般使用4%的浓度)：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%A B溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10mL 4%浓缩胶的用量，丙*(代"烯")酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

胶浓度	用量(mL)
	水	30%AB溶液	4×浓缩胶缓冲液(含蓝色染料)
4%	6.17	1.33	2.50

7．将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
8．分别加入50μL 10%APS和30-50μL TEMED(这是配制10mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
9．先灌分离胶，在胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。
10．由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离胶室温聚合30-60分钟后再灌制。
11．拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。
12．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS-PAGE电泳液，用时再稀释成1×工作液。
13．在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4μL样品中加1μL上样液)，100℃煮沸3～5分钟。短暂离心，取上清上样。
14．先用10 mA的电流电泳(对0.75mm厚×14cm×14cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
15．将电流增加到15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。


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·柱式病毒RNA提取试剂盒
编号：BTN71001
英文名称：Virus RNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在一管式病毒RNA提取试剂盒的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品中提取微量病毒RNA的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2. 灵敏度高，通过RT-PCR检测到的最终灵敏度可以达到50拷贝/mL。
3. 安全无毒，不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
4. 如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
5.与RT-PCR和荧光RT-PCR兼容。
6. 价廉物美，性价比远低于国外同类产品。
7.适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

试剂盒组成：

成分	规格
柱式病毒RNA提取溶液A	30ml
离心吸附柱(小提)	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL液体病毒样品。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体在4℃下24000 g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL后继续操作。
2. 加入0.6mL溶液A，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意：溶液A在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将溶液全部转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
4. 12000～15000g室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
5. 加入0.8mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
6. 12000～15000g室温离心半分钟。
7.在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μl通用洗脱液，然后将离心吸附柱套入一新的1.5mL离心管中，室温放置2分钟。
8. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的样品即为RNA。
9. RNA样品可以直接用于RT-PCR或逆转录反应，也可放-80℃长期保存。

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