尿嘧啶-DNA糖基化酶(人单链选择性单功能)(hSMUG1)

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百奥莱博专业生产供应尿嘧啶-DNA糖基化酶(人单链选择性单功能)(hSMUG1)哪里买，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：尿嘧啶-DNA糖基化酶(人单链选择性单功能)(hSMUG1)哪里买
产地：国产|进口
编号：BTN130649
品牌：百奥莱博
英文名：Human Singlestrand- selective Monofunctional Uracile-DNA Glycosylase
规格：500U
人类单链选择性单功能尿嘧啶-DNA糖基化酶作用于单链和双链DNA上的脱氧尿嘧啶和在C5位携带氧化基团的脱氧尿嘧啶衍生物，如5-羟基尿嘧啶、5-羟甲基尿嘧啶和5-甲*(代"酸")基尿嘧啶。其反应示意图如下：


产品特点：
1．DNA的氧化损伤研究；
2．单细胞凝胶电泳(彗星实验)。

产品组成：

 

成份	规格
hSMUG1(5000U/mL)	100μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl反应体系中，37℃条件下，1小时从含有单一dU位点的34bp双链寡核苷酸上催化切除1pmol脱氧尿嘧啶所需的酶量。

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·可调式易错PCR试剂盒
编号：BTN160903
英文名称：Controlled Error-prone PCR Kit
规格：100次
易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3´→5´校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错PCR和常规PCR的比较如下：


产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，实验人员在一定范围内可以控制突变率，一轮PCR的突变率范围在2-8突变/1000bp，更高的突变率可以通过多轮PCR达到。
3.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
4.可以扩增的DNA片段更长，达到3kb，对于3kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR专用dNTP 2.0,10×	300μl
易错PCR Mix 2.0,10×	300μl
易错PCR专用MnCl2	300μl
易错PCR专用dGTP	300μl
超纯水	1ml

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：

1. 将模板DNA稀释到1ng/uL。将引物稀释到10uM。
 注意：引物是决定易错PCR成败的关键因素，设计引物时要保证其Tm在70℃，长度在25-30nt之间，GC含量在45%-60%之间，3端GC含量低，并且没有发夹结构。
2. 根据每1000bp的预期突变数按下表确定易错PCR的反应条件中MnCl2和dGTP的用量。表中的A表示易错PCR专用的MnCl2，B表示易错PCR专用的dGTP：

预期突变数	2个	3个	4个	5个	6个	7个	8个
A的用量(μl)	0	1.0	2.5	4.0	4.0	4.0	4.0
B的用量(μl)	0	0	0	1.0	2.0	3.0	4.0

3.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要按等比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分
 注意：可以先计算出超纯水的用量，优先加水

成分	用量
超纯水	根据第2步加
易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
易错PCR 专用MnCl2	根据上步
易错PCR 专用dGTP	根据上步
自备DNA模板(1ng/μl)	1μl
自备PCR引物(10μM each)	1μl each
Taq DNA聚合酶(5U/μl)	1μl

4. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件(对1Kb长的模板而言)：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR(循环30次)	94℃ 1分钟
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。长度每增
加1Kb，时间延长1分钟。易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能的突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。
5.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
6. 克隆片段进行功能筛选、或者克隆后进行测序分析突变率、或者用此轮PCR的产物为模板，进行下一轮的易错PCR。

疑难解答：
Q：现象：没有PCR产物。
A：可能原因：一是引物没有优化，可以重新设计引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不纯，最好先胶回收；四是溶解DNA的溶液中有EDTA，降低了PCR反应体系的Mg离子浓度，可以适当补加Mg离子。
Q：现象：太多的PCR条带或PCR条带模糊一片。
A：可能原因：一是PCR循环数太多；二是复性温度太低；三是延伸时间太长；四是引物没有优化，可以重新设计引物；五是PCR条件没优化，可以使用touch-down PCR；六是模板有其他DNA污染；七是DNA模板质量不高或者浓度太高。
Q：如果需要更高的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮易错PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。



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·平末端DNA加A试剂盒
编号：BTN60105
英文名称：dA Tailing Kit
规格：50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP 存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA 尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。其流程图如下：


产品特点：
1. 简单，2×Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。
3.产物可以直接用于与T载体的连接。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA polymerase(5U/μL)	50μl
2×Tailing Buffer	1.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：反应前纯化处理：
用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3 到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/*仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/*仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。
二：加A反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：

回收的DNA片段	0.2-2ug
2×dA Tailing Buffer	25μL
Taq DNA polymerase(5U/μL)	1μL
补水到	50μL
72℃保温2小时

三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA pol


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·MAL指示剂培养基
编号：BTN130898
英文名称：MAL Indicator Medium
规格：250mL
MAL指示剂培养基，是一种发酵指示剂培养基，可以用来区别菌株是否存在麦芽糖发酵。由于pH值的变化，麦芽糖发酵菌株使指示剂变为黄色。本产品为优化的MAL指示剂培养基，包含有菌株所需要的全部营养成分和指示剂，即开即用，方便使用。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·一步式复杂样品DNA提取试剂盒
编号：BTN61202
英文名称：One-step DNA extraction kit
规格：10mL
本试剂盒是专用于从各种常见的样品中快速提取用于PCR扩增的DNA。

试剂盒特点：
1.操作简单，只用一步(约5-10分钟)即可以得到用于PCR扩增的DNA 模板，不需要任何离心、抽提等操作步骤，比常用的Chelex100提取方法和*酚/*仿方法快。
2.兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3.环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
4.尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。

试剂盒组成：

成分	规格
一步式广谱DNA提取试剂	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将约2μl液体样品(如全血、细胞培养液)或2mg的固体样品(如动物组织，约半粒芝麻大小)加入到50μl 本产品中。
注意：样品加入量可能需要根据其DNA的含量稍做调节，如果样品DNA含量少，则用量要增加，但总液体样品用量最好不要超过本产品用量的1/10；固体样品用量最好不要超过1mg/10μl的比例。下面是部分常见生物样品的DNA含量：

材料	DNA含量
精液	150-300μg/mL
血液	20-40μg/mL
精斑	20-30μg/cm2
唾液	1-10μg/mL
血斑	250-500 ng/cm2
口腔拭子	100-1500 ng/拭子
组织	50-500 ng/mg
阴道拭子	10-3000 ng/拭子
骨头	3-10 ng/mg
拔出的带发根头发	1-750 ng/发根
尿液	1-20 ng/mL
自然脱落的带发根头发	1-10 ng/发根

2. 80℃加热5分钟后。
注意：此步的条件可以根据样品的质地稍做调节。如果是液体样品，室温处理1-3分钟即可。如果是难以破裂的细胞和材料(如酵母、石蜡组织切片、血斑)，则保温时间可以延长到10-30分钟。
3. 简短振荡混匀后取裂解物直接进行PCR(裂解物体积最好不要超过PCR 体积的1/10)。
4.其余同常规操作。

疑难解答：
Q： 本产品与美国BioVenture的GeneReleaser 有何区别？
A： 本产品处理简单，只需要80℃加热5分钟即可；而GeneReleaser 加热处理复杂而繁琐，共需要9 步处理，累计时间需要10 余分钟量(具体是65℃ 30s，8℃ 30s，65℃ 90s，97℃ 180s，8℃ 60s，65℃ 180s，97℃ 60s，65℃ 60s，80℃放置)，手工操作时十分难以控制。
Q： 用本产品提取的DNA 能否用电泳方法检测？
A： 由于DNA含量太少，不能用电泳方法检测。

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