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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 库存:
603
- 靶点:
IgG(H+L)
- 级别:
多克隆
- 目录编号:
ZN1996
- 克隆性:
多克隆
- 抗原来源:
人
- 保质期:
二年
- 抗体英文名:
Rabbit Anti-Hμman IgG(H+L)Secondary Antibody,TRITC Conjugate
- 抗体名:
TRITC标记兔抗人IgG(H+L)
- 标记物:
TRITC
- 宿主:
兔
- 适应物种:
人
- 免疫原:
人IgG(H+L)
- 亚型:
IgG
- 形态:
液体
- 应用范围:
WB,ELISA
- 浓度:
1mg/ml
- 保存条件:
-20℃冻存,避光
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖TRITC标记兔抗人IgG(H+L)厂商在内的抗体抗原产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:TRITC标记兔抗人IgG(H+L)厂商
编号:ZN1996
英文名:Rabbit Anti-Hμman IgG(H+L)Secondary Antibody,TRITC Conjugate
规格:100μl
保存条件:置4℃保存一年,注意避光。
试剂内容:1ml TRITC—兔抗人 IgG 含 2mg 亲和纯化兔抗人 IgG(特异性抗体纯度 99%以上),TRITC:Ab==4-6:1,0.01M PBS,1%BSA,0.01%Thimerosal。
标记方法:TRITC 标记采用 Hijmans,W.,et al.所研究的方法。(参考文献:Hijmans,W.,et al.Clin.Exp.Immunol.,4,457(1969)
使用方法:
TRITC 标记试剂稀释液:0.01M PBS 或 TBS 缓冲液(PH7.0-7.6),加入试剂级 BSA 至 1%。
使用上述稀释液,免疫直接荧光法按 1:16 稀释,间接荧光法按 1:64 稀释。此效价仅供参考,具体的稀释度须自己预先确定。稀释后溶液应于当天使用,未用完的应弃置。
TRITC的激发光波长为550nm,荧光发射波长为620nm,为橙红色。
注意事项:请离心后,再使用!
欲了解更多TRITC标记兔抗人IgG(H+L)厂商的品牌、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
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TRITC标记兔抗人IgG(H+L)厂商关键词:兔抗人二抗,TRITC标记二抗,人IgG(H+L)二抗,TRITC标记抗人IgG(H+L)二抗,人IgG(H+L)抗体
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TRITC标记兔抗人IgG(H+L)厂商关键词:兔抗人二抗,TRITC标记二抗,人IgG(H+L)二抗,TRITC标记抗人IgG(H+L)二抗,人IgG(H+L)抗体
·EAAT1/Glast mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0432
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.EAAT1/Glast mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
EAAT1/Glast的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
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文献和实验浓度稀释至20mg/ml,将溶液放置冰浴内; (2)取相当于抗体蛋白1/100的FITC(或相当于1/30-1/40的TMRITC)溶于抗体溶液量1/10的0.5mol/L pH9.5 CB中(该溶液不稳定,2 h内应用); (3)在电磁搅拌器缓慢搅拌下将FITC(或TRITC)缓慢滴入抗体溶液中,注意避免产生气泡,约在5-10min内加完; (4)将容器加塞密闭后,连同电磁搅拌器移置于4℃,继续缓慢搅拌,使荧光素与抗体结合(偶联)12-18h(温度升高,时间缩短。如在20-25℃室温下,搅拌
羊抗大鼠IgG二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Rat IgG(H+L) 产品详情兔抗山羊IgG二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Rabbit Anti-Goat IgG(H+L) 产品详情山羊抗兔IgG二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L) 产品详情山羊抗小鼠IgG二抗, 蓝色AMCA荧光标记 AMCA AffiniPure Goat Anti-Mouse
钠缓冲液10mL,TNB 贮液10μL.30%H2O2 15μL,混匀。7、 终止液:2mol/LH2SO4四、操作步骤①抗原包被:兔抗人IgG 作为抗原,用包被液l:8000稀释,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。③封闭:加l00μL/孔封闭液,室温放置0.5h.④洗涤:用洗涤液洗3次。⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS 连续稀释(按照1:2或1:10),100μL /孔加到已包被的板上,每个样品
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