北京现货彩色预染超高分子量蛋白质标准(10-20次)(国产,

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货彩色预染超高分子量蛋白质标准(10-20次)(国产,进口)在内的一系列细胞生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京现货彩色预染超高分子量蛋白质标准(10-20次)(国产,进口)
品牌：百奥莱博
编号：ZN1883
规格：100μl
产地：国产|进口
产品保存：-20℃保存，一年有效。
产品特点：
锐利且稳定的颜色。
多种颜色 – 易于凝胶中示踪。
即用型上样 – 无需煮沸。
免疫印迹转膜效果好。
产品应用：
监控 SDS-PAGE 凝胶中的蛋白迁移。
检验免疫印迹转膜效率。
SDS-PAGE 凝胶和免疫印迹杂交膜上蛋白大小的粗略鉴定。
未染色预制胶中待切割目标蛋白的定位。
产品说明：
彩色预染超高分子蛋白质 marker 特异性用于大分子蛋白分析。其含有 8 种重组的高纯度蛋白，表观分子量范围43-315kDa。这些蛋白采用3种不同的染料分别染色。彩色预染超高分子蛋白质marker是即用型产品，使用前无需加热、稀释或变性剂处理。
使用方法：
1.室温或 37℃融化 Ladder 几分钟，确保试管中的固体完全溶解，不要煮沸。
2.轻轻混匀，确保溶液完全混匀。
3.上样：
小凝胶：5μl/泳道，凝胶厚度 0.75-1 mm。
大凝胶：10μl/泳道，凝胶厚度 1-1.5 mm。

除北京现货彩色预染超高分子量蛋白质标准(10-20次)(国产,进口)外，我公司正在打折促销以下产品：
内源性酶抑制剂(冰冻切片)   100ml
517-28-2 苏木色精 Hematoxylin
BTN90901 菌体内毒素清除剂 Bacterial Endotoxin Erasol
Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)   500ml
N,N-双(2-羟yi基)甘*酸 Bismuth sulfate 150-25-4
BL0207 鲱鱼精DNA(Herring sperm)
ARB13418 鸡N-乙酰-β-D-*基葡萄糖苷酶(NAG)含量分析 Chicken n-acetyl-β-d-glucosaminidase,nag ELISA KIT
ARB10575 人成纤维细胞生长因子23(FGF-23)含量检测 
ARB12293 大鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)Elisa定量检测 Rat anti-cardiolipin antibody igm,aca-igM ELISA KIT
F030424 胶体金标记兔抗牛IgG抗体 Rabbit Anti-Bovine IgG*GOLD
CYB162043 羊抗马IgG(抗血清) 0.5ml
S-乙酰巯基丁二酸酐 Ninhydrin 6953-60-2
BL1393 SABC山羊IgG-FITC kit
BTN100807 杜氏PBS溶液,10× Dulbecco PBS Buffer,10×
FastQuant RT Super Mix 
7447-41-8 *化* Lithium Chloride
ARB10406 人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)尿液中含量检测 Human soluble receptor activator of nuclear factor-kb ligand,srankl ELISA KIT
苄脒盐*(代"酸")盐 Calcein 1670-14-0
麝香草酚蓝指示剂   100ml
F020204 山羊抗小鼠IgG2b抗体 Goat Anti-Mouse Ig2b
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E0102 抗凝新生牛血(无菌 袋装) 500ml/1000ml/2000ml
ARB13369 牛总抗氧化能力(T-AOC)酶联免疫定量检测 
BTN70603 土壤腐殖酸清除剂 Soil Humic Acid Erasol
α-酮基缬*酸*盐 Glutathione Sepharose 4FF 51828-94-5
PY04-054  碘液  2ml/支×10支  每支添加于100ml四硫*(代"磺")酸*煌绿增菌液基础培养基中，用于沙门氏菌的检测
BL0777 基底胶9.6mg/ml
革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒 Gram positive bacterial protein extraction kit  50T|100T
ARB14025 植物血凝素(PHA)免费代测 phytohaemagglutinin,pha ELISA KIT
BTN130810 荧光尺 Fluorescent Ruler
BOC-硝基-L-精*酸 CL-HOBT 2188-18-3
维生素BT Heparin sodiu*(代"m") 541-15-1
TBS缓冲液(0.05mol/L,pH7.4)   500ml
ARB12648 大鼠酪*酸激酶B(TrkB)酶免分析 Rat tyrosine kinase b,trk b ELISA KIT
二硫赤藓糖醇 NHS 6892-68-8
ARB12796 小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA检测服务 Mouse β-galactosidase,βgal ELISA KIT
卫矛醇 Lithium stearate 608-66-2
ARB12437 大鼠骨*素/骨谷*酸蛋白(OT/BGP)含量测试 Rat osteocalcin/bone gla protein,ot/bgp ELISA KIT
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·Fibronectin/FN mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0518
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat,mouse,rabbit
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Fibronectin/FN mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Fibronectin/FN的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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