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378
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,一年
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北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
室温保存,一年有效。<br>产品说明:<br>1.超敏感,最低检测浓度为0.5 μg/mL。<br>2.线性范围在 0.5~20 μg/mL,尤其适用于低浓度的样品。<br>3.对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感,但对 Cu的还原剂和螯合剂敏感。<br>4.比 Lowry 法更加简单快捷。<br>5.试剂稳定,室温可以放置一年。<br>6.终产物稳定,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。<br>7.最短可以检测双肽,适合于分子量较小的蛋白质。<br>8.有常规(普通试管)和微量(96 孔板)两种检测模式。<br>标准品以及工作液的制备:<br>A.牛血清白蛋白标准品稀释液的制备<br>注意:上表适用于微孔板法的标准品稀释,试管法的标准品稀释可按照具体使用量进行比例扩大。<br>B.微量BCA工作液的制备<br>1.使用下列公式计算出所需工作液的总体积:<br>(标准孔数 +待测样品孔数)×(重复数)×(每个样品孔的工作液体积)= 所需工作液的总体积<br>例如:标准的试管测定每个样品需要3个不同的稀释度和2次重复(8个标准孔 + 3个待测样品孔)×(2重复)×(1 ml)= 22 ml BCA工作液(可以多配到25 ml)。<br>注意:在试管检测法中,每个样品需要1ml的工作液,在微孔板检测中,每个样品需要150μl的工作液。<br>2.配制 BCA 工作液:<br>先将溶液 A、溶液 B和溶液 C 按 50:48:2的比例混合,所得溶液即 BCA 工作液。<br>比如:5 ml 溶液 A + 4.8 mL 溶液 B +200μl 溶液 C。<br>注意:试剂C刚加入到试剂A和试剂B中时,会产生浑浊并迅速消失呈清绿色溶液。制备足够体积的工作液以检测相应数量的样品。<br>使用方法:<br>一:微孔板测定法<br>1.吸取150μl的标准品及未知样品分别至微孔板中。<br>2.滴加150μl的工作液到每孔中并充分混合30秒。<br>3.盖上微孔板并在37°C孵育2小时或60℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货微量BCA蛋白质定量试剂盒特价促销是高品质的免疫检测产品,由北京百奥莱博供应,用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多微量BCA蛋白质定量试剂盒等免疫检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:北京现货微量BCA蛋白质定量试剂盒特价促销
规格:1盒
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:ZN1874
产品规格:
溶液 A 100ml
溶液 B 100ml
溶液 C 5ml
蛋白标准品 20ml(2mg/ml)
产品保存:室温保存,一年有效。
产品说明:
1.超敏感,最低检测浓度为0.5 μg/mL。
2.线性范围在 0.5~20 μg/mL,尤其适用于低浓度的样品。
3.对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感,但对 Cu的还原剂和螯合剂敏感。
4.比 Lowry 法更加简单快捷。
5.试剂稳定,室温可以放置一年。
6.终产物稳定,检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7.最短可以检测双肽,适合于分子量较小的蛋白质。
8.有常规(普通试管)和微量(96 孔板)两种检测模式。
标准品以及工作液的制备:
A.牛血清白蛋白标准品稀释液的制备
注意:上表适用于微孔板法的标准品稀释,试管法的标准品稀释可按照具体使用量进行比例扩大。
B.微量BCA工作液的制备
1.使用下列公式计算出所需工作液的总体积:
(标准孔数 +待测样品孔数)×(重复数)×(每个样品孔的工作液体积)= 所需工作液的总体积
例如:标准的试管测定每个样品需要3个不同的稀释度和2次重复(8个标准孔 + 3个待测样品孔)×(2重复)×(1 ml)= 22 ml BCA工作液(可以多配到25 ml)。
注意:在试管检测法中,每个样品需要1ml的工作液,在微孔板检测中,每个样品需要150μl的工作液。
2.配制 BCA 工作液:
先将溶液 A、溶液 B和溶液 C 按 50:48:2的比例混合,所得溶液即 BCA 工作液。
比如:5 ml 溶液 A + 4.8 mL 溶液 B +200μl 溶液 C。
注意:试剂C刚加入到试剂A和试剂B中时,会产生浑浊并迅速消失呈清绿色溶液。制备足够体积的工作液以检测相应数量的样品。
使用方法:
一:微孔板测定法
1.吸取150μl的标准品及未知样品分别至微孔板中。
2.滴加150μl的工作液到每孔中并充分混合30秒。
3.盖上微孔板并在37°C孵育2小时或60℃放置 1 小时。
4.微孔板冷却至室温。
5.10分钟内在酶标仪上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
6.绘制标准曲线,测量样品的浓度。
二:试管测定法
1.吸取1.0ml的标准品及未知样品分别至对应标记的检测管中。
2.滴加1.0ml的工作液至每管中并充分混合。
3.盖上检测管并于60°C水浴孵育1个小时。
4.所有试管冷却至室温。
5.10分钟内在分光光度计上测量562nm时的吸光值。注意:冷却至室温后依然会继续显色。
但是,在室温时的显色比例已经很低,在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
6.绘制标准曲线,测量样品的浓度。
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北京现货微量BCA蛋白质定量试剂盒特价促销关键词:ZN1874,微量BCA蛋白质定量试剂盒,百奥莱博
·GADD34 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0555
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.GADD34 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
GADD34的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
北京现货微量BCA蛋白质定量试剂盒特价促销关键词:ZN1874,微量BCA蛋白质定量试剂盒,百奥莱博
·人TNFβ重组蛋白
编号:ZN1725
规格:100ng
来源:大肠杆菌
特异性:人
应用:WB 阳性对照
形态:冻干粉
纯度:>98%,RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件:-20℃保存 1 年以上,避免反复冻融。
·人BAD重组蛋白
编号:ZN1563
规格:100ng
来源:大肠杆菌
特异性:人
应用:WB 阳性对照
形态:冻干粉
纯度:>98%,RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件:-20℃保存 1 年以上,避免反复冻融。
·TLR15 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1402
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:chicken
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.TLR15 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
TLR15的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
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文献和实验法是十分常用的蛋白质比色定量方法,很多试剂供应商都提供基于比色皿和微孔板的BCA蛋白定量试剂盒。BCA蛋白定量法相对于其它比色定量法具有操作简单、稳定、灵敏度高等优点。相对于蛋白质的固有的280nm吸收峰检测,BCA检测法提高了蛋白检测灵敏度和特异性,消除了核酸的干扰,核酸干扰在对细胞裂解物或其他生物样品进行蛋白定量时总是一个难以避免的干扰。在碱性条件下,蛋白将Cu2+ 还原为Cu+ ,Cu+ 与BCA 试剂形成紫色络合物,如图1,其吸光值与蛋白浓度成正比。测定在562nm 处的吸收值,并与标准
目前常用比色法测定样品蛋白的含量:Bradford法(考马斯亮蓝法)、Lowry法(Folin-酚试剂法)、 BCA法等。但各有优缺点,大家可以根据具体情况选取。按相应蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。收集完蛋白样品后,为确保每个蛋白样品的上样量一致,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大,大家可以根据具体情况选取。Bradford法(考马斯亮蓝法):考马斯亮蓝G
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