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9-KRAB）要靶向 TSS 附近约 −50 到 +100 bp 的窗口； CRISPRa（dCas9-VP64 / SAM）要靶向 TSS 上游约 −400 到 −50 bp； 用敲除的逻辑去设计 CRISPRi 的 gRNA，是常见的低级错误。 --- 二、序列层面的硬禁忌，一条都不能碰 拿到候选序列后，先做这几项过滤： PAM 必须正确：SpCas9 是 3' 端 NGG；SaCas9 是 NNGRRT；SpCas9-NG 是 NG；SpRY 几乎不依赖 PAM。用错 PAM 模型会得到完全
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