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- Western Blot技术服务
- 全国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 技术资料
- 提供商：
天津津科生物科技有限责任公司
- 服务名称：
Western Blot技术服务
蛋白质印迹(Western blotting)又称免疫印迹(immunoblotting)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的母的蛋白的方法。该方法包括三个部分： SDS-PAGE凝胶电泳，蛋白质的电泳转移，免疫印迹分析。由于免疫印迹具有SDS-PAGE 的高分辨力和免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白质分析领域的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定目的蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
操作步骤
3．电泳分离蛋白质
4．转膜
根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、硝酸纤维素膜（NC膜）和尼龙膜，其中PVDF和NC膜的使用频率最高。
5．封闭
去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。常用的封闭溶液有：含BSA或者脱脂奶粉的TBST或TBS。
6．孵育一抗
一抗的选择成功与否，是整个WB实验成功的关键。
7. 孵育二抗
根据说明书推荐浓度使用TBST稀释一抗。如果说明书没有推荐浓度，可进行多个稀释比例进行摸索最佳稀释度（1:1000-1:20000）。孵育条件一般为室温1-2小时。
8. 底物孵育
选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量。
9．结果分析和检测
操作步骤
1. 获取细胞或组织裂解物
2. 蛋白质定量
常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根据情况将标本保存在-20°C /-80°C备用，或者直接进行电泳分离蛋白。3．电泳分离蛋白质
4．转膜
根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、硝酸纤维素膜（NC膜）和尼龙膜，其中PVDF和NC膜的使用频率最高。
5．封闭
去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。常用的封闭溶液有：含BSA或者脱脂奶粉的TBST或TBS。
6．孵育一抗
一抗的选择成功与否，是整个WB实验成功的关键。
7. 孵育二抗
根据说明书推荐浓度使用TBST稀释一抗。如果说明书没有推荐浓度，可进行多个稀释比例进行摸索最佳稀释度（1:1000-1:20000）。孵育条件一般为室温1-2小时。
8. 底物孵育
选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量。
凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片。
客户提供
1.足够量的生物样品，有具体要求请事先说明；
2.适合的一抗，如需我们采购请事先说明；
3.相关背景资料等。
服务期限
7个工作日。
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