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- Western Blot技术服务
- 全国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
天津津科生物科技有限责任公司
- 服务名称：
Western Blot技术服务
操作步骤
3．电泳分离蛋白质
4．转膜
根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、硝酸纤维素膜（NC膜）和尼龙膜，其中PVDF和NC膜的使用频率最高。
5．封闭
去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。常用的封闭溶液有：含BSA或者脱脂奶粉的TBST或TBS。
6．孵育一抗
一抗的选择成功与否，是整个WB实验成功的关键。
7. 孵育二抗
根据说明书推荐浓度使用TBST稀释一抗。如果说明书没有推荐浓度，可进行多个稀释比例进行摸索最佳稀释度（1:1000-1:20000）。孵育条件一般为室温1-2小时。
8. 底物孵育
选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量。
凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片。
客户提供
1.足够量的生物样品，有具体要求请事先说明；
2.适合的一抗，如需我们采购请事先说明；
3.相关背景资料等。
服务期限
7个工作日。
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文献和实验试剂耗材：SDS、甘油、Tris、溴酚蓝、丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED，APS、甘氨酸、甲醇、PVDF膜、Brandford蛋白定量试剂盒、BSA、脱脂奶粉、考麻斯亮蓝、丽春红、氯化钠、氯化钾、DTT、ECL、显影液、定影液等、显影胶片。 仪器设备：超声仪、核酸蛋白定量仪、Western-blot电泳转膜系统、摇床、曝光合、红灯等。 样本准备：收集106细胞，加入150μl SDS裂解液，冰上超声5次，定量。 SDS-PAGE 电泳： 1. 准备各溶液：小烧杯两个
样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示的RNA条带更为锐利。1、在灭菌的微理离心管内，混匀下列液体：6mol/L乙二醛 5.4μ
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